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胶质瘤是一种中枢神经系统恶性肿瘤,由于其浸润能力极强,使得手术切除这一手段难以将其根除。在血脑屏障和多药耐药的存在下,使得传统的化疗手段也无法达到理想的治疗效果。RNA干扰技术作为现代生物工程的重要里程碑之一,已经被广泛的应用于研究肿瘤的治疗当中。研究联合用药,协同抗癌,是应对恶性肿瘤的新型策略。聚合物胶束是一种可以实现化疗药物和siRNA共载的药物载体,具有生物相容性高,生物安全性好的特点,但由于结构限制使得其存在所载药物过早或过迟释放的缺点。利用细胞内外还原型谷胱甘肽浓度差异,不同细胞器pH值的差异,我们设计并且合成制备了一种可以稳定载药,并且在特定条件下触发快速释药的载药型聚合物胶束:疏水内核具有pH敏感性,用来包载化疗药物阿霉素;阳离子夹层用来荷载YAP-siRNA,引入二硫键,具有氧化还原敏感性。最外层的亲水端选用PEG,起遮蔽作用的同时,有助于实现载体在体内的长循环。课题主要包含以下三个部分:第一部分,两种聚合物 PMAPEGx-PMACYSy-PDPAz/PMAPEGx-PMACYNm-PDPAn的合成,表征与自组装。利用可逆-加成断裂链转移聚合反应(RAFT)合成两种组成相似,结构相似的聚合物,一种含有-S-S-键,一种不含。用凝胶渗透色谱,核磁共振氢谱和傅里叶变换红外光谱对聚合物的分子量和结构组成进行表征。再用芘荧光探针法检测两种聚合物的临界聚集浓度分别为0.01349(mg/ml),0.002992(mg/ml)。第二部分,载药聚合物胶束的制备与表征。用透析法制备载阿霉素聚合物胶束(DOX-PSD/DOX-PND),紫外分光光度法测定其包封率均为80%左右,最大载药量为17.6%左右。琼脂糖凝胶电泳结果显示所制备的聚合物胶束可以携载siRNA,。体外药物释放实验证明,所制备的载药聚合物胶束具有氧化还原和pH双重刺激响应性释药特征,在pH 5.0和10 mM还原性GSH刺激下72小时后,DOX-PSD中阿霉素的累积释放率为81.4%,而DOX-PND中仅为47.1%。siRNA的刺激响应性释放效果则更为明显。第三部分,DOXPXD/siRNA和DOX-PXD的体内外抗脑胶质瘤活性的研究。利用流式细胞术和共聚焦显微镜考察纳米载体的细胞摄取,胞内分布以及细胞内的阿霉素释放情况,q-rtPCR检测携载siRNA的纳米载体的基因,沉默效果。MTT实验检测了不同载药胶束对肿瘤细胞的杀伤能力,最后用裸鼠构建了异位脑胶质瘤模型,检测了不同载药胶束的体内抗肿瘤能力。结果显示,所制备的DOXPXD/siRNA和DOX-PXD对所携载的药物有良好的共递送作用,可以在细胞水平降低U87细胞中YAP蛋白的mRNA水平。MTT结果显示DOX与siRNA共载有显著的协同抗癌效果,可以降低DOX的IC50,且DOXPSD/siRNA与DOXPND/siRNA相比抗癌能力更强,具有显著性差异。体内分布实验证明,经尾静脉注射给药后,载药胶束可通过EPR效应被动靶向到肿瘤组织,抑瘤实验结果显示siRNA与DOX共载可以显著提高载阿霉素胶束的抗癌效率,DOXPSD/siRNA与DOXPND/siRNA相比,具有更显著的抑瘤效果。