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[目的] 本研究以卵巢癌细胞株SKOV3细胞富集并鉴定卵巢癌肿瘤干细胞，观察增免抑瘤复方中单体对卵巢癌SKOV3细胞及肿瘤干细胞增殖的影响，筛选抑制能力最强的有效单体，研究其对肿瘤干细胞及裸鼠移植瘤的影响，并从EMT方面探讨其作用机制，以深入理解增免抑瘤复方抗卵巢癌的作用途径。 [方法] 1卵巢癌干细胞的富集及鉴定 卵巢癌细胞株SKOV3细胞用添加碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、L-谷氨酰胺、β-巯基乙醇等成分的无血清培养基悬浮培养。实时定量PCR检测卵巢癌干细胞相关干性标志基因表达情况进行干性鉴定。 2单体对卵巢癌干细胞的体外作用 通过MTT法检测梯次浓度的ZMYL复方中6个单体对SKOV3贴壁细胞增殖的影响，筛选出最有效单体熊果酸;MTT法检测熊果酸组、熊果酸联合顺铂组对SKOV3悬浮细胞的增殖抑制作用。设立不同实验组，包括SKOV3贴壁细胞组、SKOV3悬浮细胞组、熊果酸组、联合组，Transwe11实验观察不同药物组对细胞的侵袭及迁移能力的影响;实时定量PCR测定不同药物组作用后干性基因和EMT标志物的表达变化;流式细胞术测定不同药物组对细胞周期和细胞凋亡的影响。 3单体对卵巢癌干细胞裸鼠体内移植瘤的作用 裸鼠皮下接种SKOV3悬浮球细胞，构建卵巢癌肿瘤干细胞皮下移植瘤模型，随机分为生理盐水组、熊果酸组、联熊果酸合顺铂组，腹腔注射给药17天后，测量各组移植瘤体积，称重;观察移植瘤生长曲线和生长抑制率;免疫组化检测移植瘤中Ki-67、PCNA蛋白的表达。 [结果] 1卵巢癌干细胞的富集及鉴定 1) SKOV3细胞在无血清悬浮培养条件下培养约一周后呈球样细胞团，球体紧实; 2)在无血清培养条件下的SKOV3悬浮细胞球生长速度比在分化条件培养的贴壁细胞快，两者比较差异有统计学意义(P＜0.05); 3) SKOV3悬浮球细胞干性基因标志mRNA表达量是贴壁分化细胞的4-140倍，高表达干细胞标志基因，差异具有统计学意义(P＜0.05)。 2单体对卵巢癌干细胞的体外作用 1)梯次浓度的6个单体对SKOV3细胞的增殖抑制率较阴性对照组均有显著增高(P＜0.01)，其中熊果酸IC50值最低;3.125-100mg/L浓度的熊果酸对卵巢癌干细胞的增殖抑制率较阴性组均有显著增高(P＜0.01)，IC50为74.54mg/L;顺铂浓度为50-100mg/L时对SKOV3干细胞球增殖抑制率较阴性对照组有显著增高(P＜0.01)顺铂联合熊果酸用药后，对SKOV3干细胞的增殖抑制率有显著提高(P＜0.01); 2) SKOV3悬浮细胞组穿过transwell小室的细胞比贴壁细胞组明显增加，有统计学差异(P＜0.05);熊果酸组和联合组穿过小室的细胞比对照SKOV3悬浮细胞减少，有统计学差异(P＜0.05)，迁移和侵袭能力下降; 3)熊果酸组和联合组作用于SKOV3悬浮细胞后细胞干性标志基因mRNA表达量降低(P＜0.05);熊果酸组和联合组作用于SKOV3悬浮细胞后间质标志Snail、Slug、Twist、Vimentin、N-cadherin和Fibronectin有显著下降(P＜0.05); 4)与SKOV3悬浮细胞比较，联合组细胞周期G0-G1期比例减少，有显著性差异(P＜0.05);联合组S期细胞比例较悬浮组显著增加(P＜0.05);熊果酸组、联合组早期凋亡率均明显增加，有显著差异(P＜0.05)。，熊果酸组、联合组晚期凋亡率无明显差异(P＞0.05)。 3单体对卵巢癌干细胞裸鼠体内移植瘤的作用 熊果酸组、熊果酸联合顺铂组移植瘤体积生长速度较生理盐水组慢，联合组生长速度最慢;处死前各组裸鼠移植瘤体积以生理盐水组最大，熊果酸组、联合组移植瘤体积显著缩小(P＜0.05);取材日裸鼠体重与生理盐水组相比，其余两组裸鼠体重均有所下降，联合组下降明显，有显著差异(P＜0.05);熊果酸组、熊果酸联合顺铂组PCNA、Ki-67蛋白表达下降。 [结论] 增免抑瘤复方中单体具有抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖的作用;熊果酸可以抑制卵巢癌肿瘤干细胞增殖，且随药物浓度的提高而抑制作用增强，能阻滞卵巢癌肿瘤干细胞周期于G0-G1期，诱导干细胞凋亡;可以增强肿瘤干细胞对顺铂的敏感性，协同顺铂提高抑制肿瘤干细胞增殖、促进细胞凋亡、阻滞细胞周期于S期的作用;可以抑制卵巢癌细胞向肿瘤干细胞的EMT转化，降低肿瘤干细胞的迁移及侵袭能力;熊果酸具有抑制卵巢癌肿瘤干细胞裸鼠皮下移植瘤生长的作用。