背景：在恶性肿瘤中，原发性肝癌是致死率最高，恶性程度最高的肿瘤之一，根治性手术切除是首选的治疗方法，但是术后五年的复发率及转移率仍然居高不下。恶性肿瘤最重要的生物学特性之一是转移潜能，肝癌属于上皮来源恶性肿瘤，其早期转移的主要方式是淋巴道转移。这种区域性淋巴结转移，是恶性肿瘤病患预后差、死亡率高最重要的影响因素。因此，对于肝癌淋巴道转移潜能相关基因的研究，有助于使恶性肿瘤病患复发率及死亡率降低，为临床应用提供新的治疗思路。目的：1.构建pGPU6/GFP/Neo-shRNA-Annexin A7和pGPU6/GFP/Neo-shRNA-NC表达载体，稳定转染至Hca-P细胞。2.小鼠肝癌Hca-P细胞Annexin A7表达水平下调后，研究P_Anxa7下调细胞增殖及迁移能力的变化。探索小鼠肝癌Hca-P细胞生物学行为，在Annexin A7表达水平改变后的影响。方法：1．构建pGPU6/GFP/Neo-shRNA-Annexin A7和pGPU6/GFP/Neo-shRNA-NC表达载体，稳定转染至Hca-P细胞，得到P_Anxa7下调细胞、P_{Anxa7无关序列}细胞。P细胞和P_{Anxa7无关序列}细胞作为阴性对照。2．应用Real time qRT-PCR在mRNA水平和Western blot在蛋白质水平验证，在Hca-P细胞Annexin A7基因表达水平下调。应用CCK8细胞增殖实验研究P_Anxa7下调细胞增殖能力的改变。应用Transwell小室细胞迁移实验探讨P_Anxa7下调细胞迁移能力的改变。结果：1．经过自动基因测序仪测序鉴定，表达载体的测序结果与设计序列相符，说明目的基因成功构建表达载体。表达载体pGPU6/GFP/Neo-shRNA-AnnexinA7和pGPU6/GFP/Neo-shRNA-NC稳定转染至Hca-P细胞，24小时后使用倒置荧光显微镜观察转染效率，可见绿色荧光蛋白表达。2．Real time qRT-PCR和Westernblot结果验证，Hca-P细胞Annexin A7基因表达水平明显下调，可作为细胞生物学实验中的研究对象进行后续实验。CCK8实验表明P_Anxa7下调细胞增长幅度显著低于P细胞和P_{Anxa7无关序列}细胞，说明Hca-P细胞Annexin A7基因表达下调后PAnxa7下调细胞增殖能力明显下降。Transwell小室实验表明P_Anxa7下调细胞饥饿培养后穿越Transwell小室膜细胞数显著减少，说明Hca-P细胞Annexin A7基因表达下调后P_Anxa7下调细胞迁移能力下降。结论：1．利用目的基因成功构建pGPU6/GFP/Neo-shRNA-Annexin A7和pGPU6/GFP/Neo-shRNA-NC表达载体，稳定转染至Hca-P细胞，获得P细胞、P_{Anxa7无关序列}细胞、P_Anxa7下调细胞。2．经过Real time qRT-PCR和Western blot验证，Hca-P细胞Annexin A7基因表达水平显著下调。CCK8实验和Transwell小室实验表明，下调后P_Anxa7下调细胞增殖能力下降、迁移能力下降。结合前期课题组实验结果，说明Annexin A7基因在小鼠肝癌淋巴道转移机制中起促进作用。