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第一部分 谷氨酸转运体的激活触发七氟烷预处理对大鼠海马脑片缺氧无糖损伤的保护作用
目的:利用离体海马脑片电生理技术研究谷氨酸转运体是否参与七氟烷预处理对大鼠海马脑片缺氧无糖(oxygen and glucose deprivation,OGD)损伤的保护作用。
方法:大鼠海马脑片随机分为8组(n=8),OGD组、250gmol/L苏-羟天冬氨酸(THA,谷氨酸转运体抑制剂)(T1组)、500μmol/L THA(T2组)、1000μmol/LTHA(T3组)、4%七氟烷预处理组(S组)、4%七氟烷预处理+250μmoL/L THA(ST1组)、4%七氟烷预处理+500gmol/L THA(ST2组)、4%七氟烷预处理+1000μmol/L THA(ST3组)。将海马脑片放于34℃的正常人工脑脊液(artificial cerebral spinal fluid,ACSF)中孵育2h之后,各组药物预处理40min,进行冲洗15min后,观察OGD14min、复氧供糖1h各组海马脑片顺向群峰电位(OPS)的变化。实验结束后取各组海马脑片用TTC(2,3,5一三苯基氯化四氮唑)染色,酶标仪测定OD490值,分析脑片活性。
结果:OGD损伤可使海马脑片OPS迅速降低并很快消失,OPS恢复程度很低,T1组、T2组、T3组OPS消失时间和恢复程度与OGD组差异均无显著性(P>0.05)。与OGD组比较S组的OPS消失时间明显延长、OPS恢复程度明显改善(P<0.01)。ST2组、ST3组与S组比较有统计学意义(P<0.05,P<0.01),提示七氟烷的保护作用可以被5001μmol/l THA和1000μmol/L THA所阻断。但ST1组与S组比较没有统计学差异,提示250μmol/L THA不能阻断七氟烷的保护作用。同时,4%七氟烷预处理降低脑片损伤百分率(P<0.01)。
结论:七氟烷预处理对海马脑片缺氧无糖损伤的保护作用可能有谷氨酸转运体参与.
第二部分 七氟烷预处理对大鼠海马脑片谷氨酸所致损伤的保护作用
目的:利用离体海马脑片电生理技术观察七氟烷预处理对谷氨酸(glutamine Glu)所致损伤的保护作用.
方法:随机将海马脑片分为4组(n=8),Glu(2mmol/L)组、Glu(2 mmol/L)+2%七氟烷预处理组、Glu(2 mmol/L)+4%七氟烷预处理组,Glu(2 mmol/L)+6%七氟烷预处理组。建立大鼠海马脑片Glu灌流损伤模型,观察Glu(2mmol/L,)灌流14min大鼠海马脑片OPS和TTC染色的组织损伤率的变化以及2%、4%、6%七氟烷对这一变化的影响。
结果:2mmol/L Glu使海马脑片OPS迅速降低并很快消失(1.6±0.4)min,14分钟后复氧供糖OPS恢复程度很差(9.0%±18.4%),组织损伤率明显加重(0.67±0.06)。4%七氟烷、6%七氟烷使OPS消失时间分别为(5.4±0.7)min、(6.3±1.0)min,较Glu组明显延长(p<0.01),复氧供糖后OPS恢复程度分别为(67.1%±18.8%、70.6%±17.2%),较Glu组明显改善(p<0.01),组织损伤率分别为(0.36±0.08、0.30±0.05),较Glu组明显减轻。而2%七氟烷与Glu组差异无显著性(p>0.05)。
结论:4%七氟烷、6%七氟烷预处理对大鼠海马脑片Glu所致损伤有显著的保护作用。
第三部分 七氟烷预处理对大鼠海马脑片缺氧无糖损伤的保护作用——突触后谷氨酸受体的机制
目的:探讨七氟烷预处理对离体大鼠海马脑片OGD损伤的保护作用与突触后谷氨酸受体的关系。
方法:随机将海马脑片分为6组(n=8),OGD组、BCI+AP5(BA组)、BCI+CNQX(BC组)、4%七氟烷预处理(S组)、4%七氟烷预处理+BCI+AP5(SBA组)、4%七氟烷预处理+BCI+CNQX(SBC组)。在常规人工脑脊液中分别加入GABAA-R的特异性阻滞剂BCI(bicuculline)和NMDA—R的特异性阻滞剂AP5(D-(-)-2-Amino-5-phosphonopentanoic Acid)来获得非NMDA—R介导兴奋性突触后电位,加入BCI和非NMDA-R阻滞剂CNQX(6,7-Dinitroquinoxaline-2,3(IH,4H)-dione)来获得NMDA—R介导的兴奋性突触后电位,观察4%七氟烷预处理对OGD损伤兴奋性突触后电位OPS的变化和组织损伤率的影响。
结果:在常规ACSF中加入BCI(50μmmol/L)+AP5(20μmmol/L)或BCI (50μmmol/L)+CNQX(100μmmol/L)对缺氧无糖导致的OPS变化没有显著的影响,4%七氟烷预处理时,常规ACSF中加入BCI+AP5能取消4%七氟烷对缺氧无糖损伤的保护作用,而加入BCI+CNQX对七氟烷的作用没有影响。
结论:七氟烷预处理对海马脑片缺氧无糖损伤的保护作用中可能有NMDA-R参与,而非NMDA-R可能没有参与其保护作用。