论文部分内容阅读
酸性亮氨酸核磷酸蛋白32B(acidic leucine-rich nuclear phosphoprotein 32B,ANP32B)属于进化相对保守的ANP32蛋白家族,关于其功能的报道甚少。本课题组近年来专注于ANP32B的生物学功能研究:1)利用小分子化合物开展白血病细胞凋亡的亚细胞器蛋白质组学研究,发现ANP32B是半胱氨酸caspase-3的底物,并鉴定其剪切位点;2)报道抑制ANP32B表达能增强白血病细胞的凋亡敏感性,促进维甲酸诱导的白血病细胞分化;3)明确ANP32B在乳腺癌组织中高表达,ANP32B缺失抑制AKT的磷酸化,显著抑制乳腺癌细胞在体内外的增殖,提示ANP32B作为癌基因促进了肿瘤的发生。本研究拟分析ANP32B在肝癌组织中的表达情况及其对肝癌细胞生长的影响,以期为寻找肝癌治疗的潜在靶标打下基础。在本研究中,我们从临床样本、细胞系和小鼠中深入探讨ANP32B在肝癌发生发展中的作用。首先,利用公共数据库平台的芯片数据以及临床的肝癌样本分析发现ANP32B在肝癌组织中高表达,且ANP32B高表达与肝癌病人的预后负相关。继而,运用shRNA和CRISPR/Cas9技术在肝癌细胞系中抑制ANP32B表达,发现ANP32B敲除明显抑制肝癌细胞的生长、克隆形成、恶性转化以及小鼠体内的成瘤能力。进一步地,我们对ANP32B维持肝癌细胞生长的分子机制开展研究,流式细胞仪检测发现肝癌细胞中抑制ANP32B表达引起明显周期阻滞,并伴随细胞周期相关蛋白的改变,而细胞凋亡没有明显影响。同时,我们对ANP32B敲除组和对照组的肝癌细胞进行RNA-seq检测,发现抑制ANP32B后明显下调的基因646个,明显上调的基因有364个,对差异表达的基因进行通路富集分析后发现和细胞增殖相关的MAPK和PI3K-AKT通路发生显著性的改变,Western-blot检测发现肝癌细胞中抑制ANP32B的表达能引起磷酸化AKT的下调,提示ANP32B可能通过调控AKT活化继而影响肿瘤增殖相关的信号通路。这些研究结果不仅揭示了ANP32B在肝癌中的新功能及其作用机制,并且有望为肝癌的治疗提供潜在的药物靶标。