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作为一种广谱高效的有机磷杀虫剂,甲胺磷（methamidophos,MTP）被广泛应用于水稻、棉花和蔬菜等农作物害虫的防治,但同时甲胺磷又是一种剧毒农药,易被植物吸收,易随流水迁移和扩散,这在很大程度上对农业生产与农村环境安全造成不利影响。因此,甲胺磷的残留检测,尤其是农药残留速测技术的研究在建立公众食品安全保障体系中具有现实意义。本研究以甲胺磷为对象,利用甲胺磷噬菌体单链抗体库筛选到的阳性克隆28D4菌株制备了特异性识别甲胺磷的scFv抗体,建立了甲胺磷间接竞争ELISA方法,并用该ELISA方法测定了大田稻谷和小白菜样品中的甲胺磷残留量。一、抗甲胺磷单链抗体表达条件的优化及性质鉴定以抗甲胺磷噬菌体单链抗体库筛选到的阳性克隆28D4为研究对象进行了抗甲胺磷单链抗体表达条件的优化试验及性质鉴定。结果显示,优化后的表达条件为:诱导温度30℃,IPTG终浓度0.25mM,诱导时间20 h;在优化表达条件下,单链抗体的表达量约0.95mg/L培养基,比没有优化条件下的产量提高近0.2mg/L;该抗体的亲和常数为（3.14±0.99）×107L/mol;该抗体与乙酰甲胺磷的交叉反应率为3.0%,与其它八个有机磷农药的交叉反应率均小于0.1%。二、甲胺磷间接竞争ELISA检测方法的建立以上述HM3-OVA以及scFv抗体建立了甲胺磷的检测曲线,同时还确立了该检测曲线的工作条件和基本参数,并进一步对该检测方法进行了准确度和精确度方面的评价。甲胺磷ELISA检测曲线的最佳检测条件为:包被抗原（HM3-OVA）0.5μg/mL（稀释倍数为1:20000）,抗体稀释度为1:320,最佳封闭物为3%脱脂奶粉,抗原抗体反应体系中氯化钠的离子强度为0.05 mol/L,最适PH值为6.5。在上述条件下,通过间接竞争ELISA程序得到一条竞争曲线,甲胺磷在1～500μg/mL范围内,Logit（B/Bo）与甲胺磷浓度的对数值呈显著的线性关系。以[Logit（B/B0）]作纵坐标（Y）,甲胺磷浓度（μg/mL）对数值作横坐标（X）,得线性回归方程Y=-1.0116X+2.0421,其相关系数R2=0.9669,IC50=104.4μg/mL;检出限IC20为4.45μg/mL。在该线性范围内,标准曲线的批内批间变异系数分别为2.1%和7.0%。水、稻谷和小白菜样品中甲胺磷的平均回收率分别为108.7%、89.8%和93.2%,且三个样品各自的添加曲线与所建立的标准曲线平行。三、甲胺磷间接竞争ELIsA检测方法的初步应用2006年,采集江苏各地大田稻谷12份,安徽大田稻谷1份。ELISA检测为阳性的样品为8份,占样品总数的61.5%;阳性样品中甲胺磷的残留量为0.17～0.83mg/kg,8个阳性样品的平均残留量为0.41±0.23mg/kg。2006年12月,于南京东郊露地菜地和菜场采集的17份小白菜样品中,ELISA检测为阳性的样品1份,该阳性样品为市场上采集,其甲胺磷残留量仅为0.395±0.013mg/kg。同时进行的GC分析结果表明,同一样品用ELISA检测获得的结果与GC分析得到的结果呈显著的线性关系,ELISA值=1.0443×GC值-0.007,n=9,相关系数r=0.9986。甲胺磷在小白菜中的残留和消解动态试验表明,冬季露地小白菜上甲胺磷的残留动态方程为Y=0.56462e-0.113T,相关系数r=-0.9931,降解速率常数k为0.113,半衰期为6.13d。