固相法合成丙型肝炎疫苗多肽工艺研究

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本文以工业化生产为目的,研究了用Fmoc固相法人工合成丙型肝炎疫苗多肽(以下简称疫苗多肽)的生产工艺,比较了Wang树脂和二氯三苯甲基树脂(以下简称二氯树脂)在固相合成中的的优势和劣势,以及粗产物肽和目标肽的产率和纯度;创造性的引入N~α-Dmb基团,提高了困难氨基酸Val的连接率;优化了脱保护的策略以及切割试剂的选择;通过质谱鉴定分析所得目标多肽的分子量,用RP-HPLC进行粗肽的分析和纯化,系统完整的建立了整套合成纯化工艺路线及相关的工艺参数,为后续的工业化生产奠定了坚实的基础。采用该合成纯化工艺路线,以二氯树脂为载体,合成的粗肽产率达到了90.76%,纯化后的目标肽产率为63.02%纯度达到了98.5%,并实现了18克每批的合成量。二氯树脂以其高效率、低成本、产品的高纯度完全符合工业化生产疫苗多肽的各项经济技术指标。论文包括以下四个部分:1文献综述部分,简述了丙型肝炎疫苗的研究现状,详细介绍了多肽固相合成技术中的合成方法、分离纯化与鉴定技术,最后概述了多肽类药物的应用情况与研究展望。2采用Fmoc固相法人工合成了疫苗多肽,比较了两种树脂在合成过程中的异同点,对合成过程中的几个重要步骤和难点进行了优化和改进,如针对困难氨基酸Val的连接,设计了引入N~α-Dmb基团的独特合成策略,提高了连接率及切割效率,确定了合成工艺中相关的各项工艺技术参数。最后用二氯树脂做为载体进行了18克每批的疫苗多肽合成。3用RP-HPLC进行粗肽的分析和纯化,根据疫苗多肽的理化性质采用乙腈—水的流动相体系,并确定了RP-HPLC分析和纯化的条件。4总结了实验结果,确定了疫苗多肽合成、纯化工艺路线及相关的工艺技术参数。
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