贯叶连翘(贯叶金丝桃，Hypericum perforatum L,HPL)，又名圣约翰草(St.John's wont)，为多年生金丝桃科金丝桃属的草本植物，分布极广，北美、欧洲和亚洲均有分布。贯叶连翘是近年来国际上最畅销草本之一，也是国际医药市场上最重要的抗抑郁植物制剂原料。金丝桃素(Hypericin)是贯叶连翘中最具有生物活性的物质，近年来，国内外研究发现其具有优良的生物活性，具有抗抑郁，抗病毒，和光活性作用，具有抗逆转录病毒作用，对艾滋病，肿瘤有治疗作用，深受国际医药界重视。以金丝桃素为主要成分治疗抑郁症，甲型肝炎，乙型肝炎及艾滋病的药物在德国，英国等国家上市[1,2,3,4]。本试验采用灵敏度较高的高效液相一荧光检测法，对贯叶连翘提取物中金丝桃素的含量进行测定，为开发金丝桃素新制剂提供试验基础。 目的：建立金丝桃素的含量测定方法；同时为金丝桃素在小鼠体内的药代动力学研究奠定基础。 方法：(1)提取方法。(2)色谱条件的选择：选择色谱柱、检测波长、调整流动相的组成、比例、流速，使金丝桃素的色谱峰符合检测要求。(3)系统适用性试验：在确定的色谱条件下，考察金丝桃素的分离度、理论塔板数、对称因子，使之符合要求。(4)标准曲线的制备：配制系列浓度的金丝桃素的标准溶液，分别进样测定峰面积，以金丝桃素标准溶液的浓度为横坐标，相应的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。(5)最低检测限试验：逐步稀释金丝桃素的对照品溶液，进样测定，直至金丝桃素色谱峰的峰高为噪音的三倍。(6)精密度试验：精密吸取金丝桃素标准品溶液适量，在选定色谱条件下重复进样5次，记录峰面积。(7)稳定性试验：取供试品溶液分别放置0，1，2，4，6，8，10小时后，按已确定的色谱条件测定峰面积。(8)重现性试验：取同一批号供试品6份，制备供试品溶液，分别进样测定峰面积。(9)回收率测定，取已知含量的金丝桃素溶液3份，精密加入对照品适量，依法测定金丝桃素的含量。(10)金丝桃素的含量测定：制备金丝桃素的供试品溶液6份，分别进样测定峰面积，计算金丝桃素的含量。 结果：(1)提取方法：最佳提取方法为5倍量乙腈提取，涡旋1分钟提取。(2)最佳色谱条件：色谱柱：色谱柱规格：YMGC18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：甲醇：四氢呋喃：0.1mol·L-1磷酸盐缓冲液=45:30:25；流速：1.0ml·min-1：激发波长315 nm，检测波长590 nm；柱温：35℃；进样量：20μl。(3)系统适用性试验：在上述色谱条件下金丝桃素的峰型良好，无杂质峰干扰，保留时间约17分钟，其理论踏板数大于4000，与相邻色谱峰的分离度均大于3。(4)标准曲线的制备：金丝桃素在0.025-10ug·ml-1浓度范围内与峰面积线性关系良好，回归方程为y=53212×-15.551，相关系数r=0.9950(n=5)。(5)检测限：最低检测浓度为0.25mg·l-1。(6)精密度试验：在三种浓度条件下试验的RSD分别为2.49％,0.26％，1.42％。(7)稳定性试验：样品的峰面积的相对标准偏差RSD为1.56％，表明样品溶液在零下20℃下10小时内稳定性良好。(8)重现性试验：样品含量的相对标准偏差RSD为0.59％，重现性良好。(9)回收率试验：高，中，低三种浓度的平均加样回收率分别为100.7％，99.56％，99.45％。(10)样品含量测定：金丝桃素的含量在3％范围内。结论：本研究所建立的高效液相一荧光检测法，对贯叶连翘提取物中金丝桃素的含量进行测定，方法快速简便，精密度和准确度都符合定量分析的要求，适合贯叶连翘提取物中金丝桃素的含量测定。