论文部分内容阅读
脂肪酶是催化长链甘油三酰酯水解反应的酶,为重要的工业用酶之一。低温脂肪酶具有低温下高催化活性的特点,应用前景广阔。低温脂肪酶多数为极端嗜冷菌产生,极端嗜冷菌生长条件相对苛刻,产酶相对不易,严重制约了低温脂肪酶的发展。本论文从常温的自然生境土样中筛选出1株高产低温脂肪酶菌株。通过对其菌株形态、生理生化特性及16S rDNA分子鉴定,确定其为伯克霍尔德菌属(Burkholderia),命名为Burkholderia mana SYBC LI-1。论文考察了菌株B. mana SYBC LI-1的摇瓶发酵培养情况,确定适宜的摇瓶发酵培养基为(g/L):可溶性淀粉10、牛肉膏15、NaNO3 0.252、橄榄油40、OP 10;在发酵条件为接种量为(V/V)10%,装液量为30 mL/250 mL,30℃,初始pH 7.5,摇床转速200 r/min,培养48 h,脂肪酶酶活达85.23 U/mL,较优化前提高了3.63倍。论文对菌株B. mana SYBC LI-1脂肪酶的分离纯化进行了初步探讨,研究了硫酸铵分级沉淀﹑乙醇分级沉淀和双水相萃取(ATPS)3种大量纯化方法。其中ATPS适宜的体系为PEG 2000 (W/W) 10%,K2HPO4 (W/W) 15%,pH 8.0。在此条件下脂肪酶分配系数3.7,纯化系数4.1,回收率86.5%,对实际大规模制备有一定的参考价值。论文还对B. mana SYBC LI-1脂肪酶粗酶的酶学性质进行了研究,结果表明:该酶的最适pH为9.5,有较宽的pH稳定性,在pH 3.5～pH 10之间相对酶活均超过75%。该脂肪酶的最适作用温度为20℃,0℃时仍保留约70%的酶活,属于低温脂肪酶;对热不敏感,70℃以下保温60 min仍保持75%以上的酶活。在终浓度为1 mmol/L时,Fe2+及Fe3+均有较大的激活作用,Co2+和EDTA则表现较强的抑制作用。此外,该酶还表现较好的耐醇性。