阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种神经退行性疾病,它的发生、发展过程与遗传、表观修饰、环境等因素有关,关于阿尔茨海默病的学说有很多种,主要包括“胆碱功能障碍假说”、“淀粉样蛋白级联假说”、“tau蛋白假说”、“病毒感染假说”等。一直以来,对于AD药物的研发重点都放在消除Aβ的沉积,以期望改善患者的认知功能障碍,但有关药物研发的相继失败证明此途径行不通。近两年提出的“病毒感染假说”是指AD是由1型单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus 1,HSV-1)感染引起的,而这一假说的提出使得HSV重新进入人们的视野中。单纯疱疹病毒可以引起Aβ的沉积和tau蛋白的过度磷酸化,而这两者是AD的主要神经病理学特征。一直以来,人们普遍认为Aβ沉积所形成的老年斑是AD的罪魁祸首,因此Aβ一度成为众矢之的,但是Aβ也是抗菌肽,具有抗细菌、抗真菌以及抗病毒的作用。研究表明Aβ可以包裹疱疹病毒,以保护神经元不受损伤。目前,对于HSV-1的治疗是使用一些抗病毒药物,如阿昔洛韦等,但这些抗病毒药物也只是缓解患者的疼痛程度及降低发生频率,并不能达到治愈的目的。所以对于HSV-1的感染,最有效的方法就是预防,也就是接种疫苗。实验室的前期研究结果表明,蛋白质二硫键异构酶(Protein disulfide isomerase,PDI)可以增加外源蛋白在毕赤酵母中的表达量,所以本研究采用过表达PDI的毕赤酵母X-33-PDI作为外源蛋白的表达菌株,以增加外源蛋白的表达量。从疫苗的角度出发,考虑到目前疫苗主要是注射型疫苗,而这种疫苗研发过程中需要蛋白纯化,成本高,而且运输过程中必须保证全程冷链,使用时也需要专业的医护人员才可以操作,所以我们采用酵母表面展示技术构建酵母口服疫苗,酵母展示体系包含三部分:M细胞特异性配体,起到靶向性作用;HSV-1包膜糖蛋白D,病原体蛋白,即抗原;α凝集素,锚定蛋白。酵母表面展示菌株构建成功后,我们利用荧光显微镜观察了目的蛋白在酵母表面的定位情况,发现与对照组相比,实验组菌株的表面可以观察到绿色荧光,而对照组菌株无绿色荧光,证明目的蛋白已经被成功诱导表达,且被展示在酵母表面上;同时利用免疫印迹实验验证了目的蛋白的表达情况,提取酵母细胞壁蛋白做western blot实验,结果发现在实验组的细胞壁中检测到目的蛋白,而胞外产物中不含有目的蛋白,这再次验证了目的蛋白已被表达且定位在酵母细胞壁上,并未出现泄漏的情况,同时对照组的细胞壁蛋白及胞外产物中均未检测到目的蛋白。以上验证成功的菌株经过目的蛋白的诱导表达后,给BALB/c鼠口服饲喂使用,饲喂时间分别为第1、3、5、7、9、11周,每周饲喂5天,然后定期收集小鼠血液样本及粪便样本,血样样本经离心后获得血清,粪便样本处理成匀浆后离心获得上清,采用ELISA的方法验证特异性抗体浓度,结果表明,血液样本中的特异性抗体IgG,粪便样本中的特异性抗体IgA随着时间的延长逐渐增多,与对照组小鼠相比,实验组小鼠具有显著性差异,证明可以有效引起体液免疫应答及粘膜免疫应答,这为HSV-1的疫苗研发奠定了实验基础,有望用于单纯疱疹病毒感染的预防,同时也可能为AD的干预打开一扇新的大门。