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肺鳞癌作为肺癌发病的常见类型，其发生发展是一个多因素、多基因及多途径改变的复杂过程，虽然从基因和转录水平对其进行了许多成功的研究，但其癌变机制仍不十分明确，尚缺乏有效的用于肺鳞癌早期诊断和预后监测的特异性分子标志物。M13噬菌体是转型寄生于细菌细胞内的一类病毒，对宿主的特异性高且稳定，被广泛应用于实验中，从最初的细菌分型到细菌感染治疗再到噬菌体展示技术筛选肿瘤特异性标志物以及近年兴起的肿瘤免疫治疗，噬菌体都充当了重要的角色。在噬菌体展示技术上的应用推进了肿瘤分子靶向治疗中肿瘤特异性标志物的筛选，但是重组噬菌体与靶分子的结合有两种情况：一是它自身的衣壳蛋白表面与靶分子结合，二是插入衣壳蛋白呈现在它表面的外源多肽与靶分子结合。如果M13噬菌体不经过展示就能够和肺鳞癌组织发生特异性结合，那在筛选肿瘤的特异性标志物上就大大减少了工作量和成本，而且结合M13噬菌体在肿瘤免疫治疗上的应用，也为肺鳞癌的治疗也提供了实验依据。本课题利用免疫组化技术，以未经展示的M13噬菌体作为与肺鳞状细胞癌组织反应的抗体，结果显示M13噬菌体与肺鳞癌之间存在特异性结合的现象；同时以pUC19为克隆载体，pET28a为表达载体表达融合His-tag的M13噬菌体衣壳蛋白：PⅢ、PⅥ、PⅦ、PⅧ、PⅨ蛋白，初步认定M13噬菌体的PⅢ蛋白能够和肺鳞癌组织发生特异性结合。本论文主要分为以下三个部分：1.M13噬菌体与肺鳞癌组织的特异性结合本部分我们扩增并纯化了M13KE噬菌体，并以M13KE噬菌体为一抗，应用免疫组化技术与肺鳞癌组织芯片，以及肺鳞癌组织病理大片结合，经DAB显色和苏木素复染后可以看出肺鳞癌组织能够和M13噬菌体特异性结合，胞核深褐色深染，胞浆浅褐色浅染，且对正常细胞没有特异性结合，结果为阴性。2.克隆M13噬菌体的衣壳蛋白本部分我们以pUC19为克隆载体，pET28a为表达载体，表达融合His-tag标签的M13噬菌体的衣壳蛋白，同时纯化了M13噬菌体的吸附蛋白PⅢ蛋白。3.PⅢ蛋白与肺鳞癌组织的特异性结合本部分应用免疫组化技术以纯化的PⅢ蛋白为一抗，以鼠源抗His-tag标签的抗体为二抗，以HRP标记的抗小鼠的抗体为三抗，经DAB显色发现M13噬菌体的吸附蛋白PⅢ蛋白能够和肺鳞癌组织特异性结合。综上所述，本课题利用免疫组化技术得出M13噬菌体能够和肺鳞癌组织特异性的结合，同时以分子克隆技术成功克隆出了M13噬菌体的PⅢ和PⅥ蛋白，并纯化出PⅢ蛋白，经免疫组化技术得出该蛋白能够和肺鳞癌组织特异性结合。这对于后续的肺鳞癌的检测与治疗提供了实验依据。同时，表明M13噬菌体展示技术上在筛选肿瘤特异性标志物中的应用需要考虑噬菌体本身结构的影响。