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目的观察不同月龄新西兰大白兔椎间盘组织中血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的变化情况,探讨它们与椎间盘退变的关系。方法(1) 40只健康新西兰大白兔,按1、3、6、9、12、18、24及30月龄,分成8个月龄组,每组5只。1、3和6为低月龄组(生长期),9和12为中间月龄组(成熟期),18、24和30为高月龄组(退变期)。(2)取兔椎间盘(L5/6、L6/7和L7/S1)组织,室温下在4%的多聚甲醛溶液中固定3d,Von Ebner法脱钙1周,常规石蜡包埋,切片。(3)行HE染色观察各月龄兔椎间盘组织结构情况,行免疫组织化学染色检测VEGF和bFGF的表达情况。(4)应用图像分析系统测定染色阳性细胞的累积光密度值(integrated optical density,IOD),以IOD值的高低显示bFGF和VEGF表达的强弱情况。结果(1) HE染色光镜检测结果:低月龄组兔整个椎间盘组织结构十分清晰,纤维环完整致密,胶原纤维走形有序,髓核与纤维环界限清楚,髓核内细胞较小,呈圆形和类圆形,数量较多,软骨终板结构清晰,软骨细胞较多,增生活跃。中间月龄组纤维环结构完整,胶原纤维增大增粗,细胞形态较低月龄增大,细胞数量较低月龄组明显减少。高月龄纤维环胶原纤维排列紊乱,出现缝隙,并可见纤维断裂或缺失,随着月龄的增加组织结构紊乱的程度逐渐加重;髓核内胶原排列紊乱,基质降解明显,细胞变大变圆,呈类软骨样,并且细胞群集,周围形成大量基质。软骨终板结构紊乱,钙化严重。在30月龄组椎间盘组织破坏比较严重,椎间盘组织中可见散在钙化灶。(2) VEGF在椎间盘组织中的表达变化:低月龄兔纤维环及髓核内细胞有阳性表达,纤维环周围及软骨终板的内皮细胞表达强阳性;中间月龄较前低月龄的VEGF表达有所下降,呈逐渐减弱趋势,阳性表达主要集中在纤维环周围部位血管内皮细胞,软骨终板、髓核内几乎看不到阳性细胞;高月龄组表达又出现逐渐增强趋势,纤维环内纤维细胞、髓核内类软骨细胞都呈阳性表达,尤其是30月龄组椎间盘中大量出现的血管内皮细胞中呈强阳性表达。(3) bFGF在椎间盘组织中的表达变化:bFGF在低月龄兔纤维环最外围均匀表达,染色比较重,纤维环外围血管内皮细胞胞浆表达阳性,软骨终板中的软骨细胞和血管内皮细胞呈阳性表达。中间月龄的纤维环中bFGF染色较低月龄组逐渐变浅,软骨终板表达减弱,髓核中几乎见不到阳性表达产物。高月龄兔纤维环周围的类软骨细胞和成纤维细胞中表达逐渐增强,特别是在纤维环的前部圆形的类软骨细胞和新生成的血管内皮细胞中bFGF高度表达;髓核类软骨细胞也呈阳性表达,并随月龄增大而逐渐增强。(4)免疫组化显示,VEGF和bFGF的IOD值在1月龄组表达最高,IOD值分别是57.67和38.22,从3,6,9月龄逐渐下降,在12月龄组左右表达最低,其IOD值分别是12.41和7.47,以后在18,24月龄又逐渐上升,到30月龄组又表达较高,IOD值则分别为37.54和27.93。VEGF和bFGF在低月龄组和高月龄组的IOD值与中间月龄组的IOD值相差非常显著(P<0.01)。结论(1)随着月龄的增加,椎间盘中各组织结构成分发生从生长、成熟到退变的相应变化。(2)随着月龄的改变,VEGF和bFGF的表达都经历了从有到无,再从无到有的变化,它们的表达强度也都随着月龄从强到弱,再从弱到强。(3)随着月龄的增加,VEGF和bFGF的表达和椎间盘组织结构的变化具有相似性,其表达强度与椎间盘的生长、成熟及退变密切相关。