通过对多杀菌素产生菌（Saccharopolyspora Spinosa）Co329菌株进行分离复壮，获得一株遗传性能较为稳定的菌株Co329-21，以Co329-21为出发菌株进行紫外线诱变育种，获得比出发菌株Co329-21效价（25μg／mL）提高9.7％的菌株UV125，对UV125进行NTG诱变，获得比UV125效价（27μg／mL）提高8.6％的菌株N263，以N263为出发菌株进行了⁶⁰Coγ7射线诱变，得到比N263效价（302μg／mL）提高21.5％的菌株Co305。以菌株Co305为出发菌株，进行原生质体紫外诱变，得到一株发酵效价提高18.7％的菌株PU446（43μg／mL），通过对PU446进行链霉素筛选获得一株发酵效价提高11.4％的菌株S119（485μg／mL）。通过以上育种多杀菌素菌种发酵效价提高了91.7％。以S119、PU131（试验室筛选，长势较好，发酵效价286μg／mL）为出发菌株，通过测定生长曲线，探索甘氨酸浓度和溶菌酶的酶解浓度、时间、温度对原生质体形成的影响，确定制备原生质体的最佳条件为：种子液中加入甘氨酸浓度0.4mg／mL、培养48小时，酶解浓度4mg／mL、酶解温度32℃、酶解时间90min。对4种再生培养基的比较，确定以改良高氏培养基为较优的再生培养基。通过原生质体灭活方式融合亲本S119、PUl31筛选得到一株分别比亲本菌株效价提高12.6％和90.9％的融合子R287菌株（54μg／mL）。传代试验表明菌株UV125、N263、C0325、PU446、S119和R287传代均比较稳定。另外，对菌株R287摇瓶发酵过程中的还原糖、总糖、铵离子及可溶性磷的测定，为多杀菌素工业发酵提供参考指标。