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第一部分CILP2表达上调对氧化低密度脂蛋白诱导的泡沫细胞形成的影响目的:在体外,建立泡沫细胞模型,探讨CILP2表达上调,是否对氧化低密度脂蛋白诱导的泡沫细胞形成产生影响。方法:用佛波酯(PMA)处理THP-1细胞24小时,诱导成巨噬细胞。诱导成功后与氧化低密度脂蛋白相互作用24小时,在体外建立泡沫细胞模型。用腺病毒载体Ad-CILP2感染巨噬细胞,实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测CILP2表达上调的效率,油红染色处理细胞爬片,观察CILP2表达上调,对氧化低密度脂蛋白诱导的泡沫细胞形成的影响。结果:油红染色结果显示泡沫细胞体外模型构建成功。利用Ad-CILP2感染细胞后,巨噬细胞内CILP2 m RNA水平明显增高(P<0.01),且Ad-CILP2+ox LDL组比Ad-GFP+ox LDL组泡沫细胞形成明显增多。结论:CILP2增加氧化低密度脂蛋白诱导的泡沫细胞形成。第二部分CILP2上调增加氧化低密度脂蛋白诱导的泡沫细胞形成过程的机制研究目的:探讨CILP2上调增加氧化低密度脂蛋白诱导的泡沫细胞形成过程的可能机制。方法:用荧光标记的氧化型低密度脂蛋白(Dil-ox LDL)作用于巨噬细胞,荧光倒置显微镜观察对脂质的摄取情况。利用RT-PCR检测介导脂质摄取的清道夫受体CD36、LOX-1、SR-A m RNA的表达。利用western blot检测CD36蛋白水平的表达。利用RT-PCR检测参与胆固醇外流调节的ABCA1、ABCG1 m RNA的表达。用PPAR-γ预处理细胞24小时后,利用RT-PCR检测CD36、LOX-1 m RNA的表达。结果:CILP2增加荧光标记的氧化型低密度脂蛋白的摄取。与Ad-GFP+ox LDL组比,Ad-CILP2+ox LDL组CD36 m RNA的表达明显升高(P<0.01),LOX-1 m RNA的表达明显升高(P<0.05),但CILP2表达上调对SR-A、ABCA1、ABCG1 m RNA的表达无影响。CILP2使CD36蛋白的表达增加(P<0.01)。巨噬细胞给予PPAR-γ激动剂后,CD36 m RNA的表达升高(P<0.05)。而给予PPAR-γ抑制剂后,CD36 m RNA的表达降低(P<0.05)。用PPAR-γ激动剂、抑制剂处理对LOX-1 m RNA的表达无影响。结论:CILP2通过PPAR-γ信号通路的激活作用,使巨噬细胞表面CD36的表达增加,从而增加脂质摄取导致泡沫细胞的形成增多。