抗人肺癌单抗LC-1的单链抗体的构建和研究

来源 :中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所 中国科学院上海生命科学研究院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:gn8888
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
肺癌是威胁人类最严重后种癌症,约占全部癌症发病率的20﹪-30﹪.全世界许多实验室都致力于肺癌的研究.以往我们实验室建成一株杂交廇细胞LC-1,它分泌的单抗突出的优越性是能与四种病理类型的肺癌(即肺腺癌,肺鳞癌,肺大细胞癌,肺小细胞癌)都能反应.但由于该单抗是鼠源性单抗,可能产生HAMA反应,限止了单抗LC-1的临床应用.我们应用了基因工程的手段去改造.该工作中还采用单链抗体的方法改造LC-1单抗.我们根据SOE的原理设计了linker引物:C TGG GGC CAA GGG ACC ACG GTC ACC GTC TCC TCA GGT GGA GGG GGT TCA GGC GGA GGT GGC TCT GGC GGT GGC GGA TCG GAC ATT GAG CTC ACC CAG TCT C.用该引物和VLFOR修饰LC-1单抗轻链可变区,让它带上(GGGGS)<,3>的连接肽和能与重链退火的一段序列,将修饰后的VL与等摩尔的VH做SOE得到单链抗体.单链抗体经三次选择/扩增的噬菌体-抗体库技术亲和力成熟后,随机挑取三个克隆测序,结果单链抗体实体基因部分仍然没变.将成熟的单链抗体装入表达质粒pPROEXHTb中,重组质粒转导入大肠杆菌KC8细胞中.实验表明单链抗体完全表达在包涵体中.包涵体蛋白用变性液(8 mol/Lurea,50 mmol/L Tris(pH8.0),300 mmol/L NaCl,10 mmol/L β-Merc)溶解,并用Ni-NTA柱子亲和纯化.纯化的单链抗体经变性/复性[用(4 mol/L urea,50mmol/LTris(pH8.0),1 mmol/L GSSG,0.1 mmol/L GSH)透析]后,竞争ELISA显示,复性的单链抗体具有较高的抗原结合活力.单链抗体分子量小,易穿透组织到达靶位点,血清中的半衰期短,廓清快,分子为一个基因,很利于基因工程操作,并且还能用噬菌体抗体库技术提高亲和力,且我们的体系中单链抗体的产量高,这为LC-1单抗的临床应用奠定了基础.
其他文献
信息时代的大背景下,随着新课程改革的推波助澜,我国教育事业在高速发展,高中信息技术课程也受到社会各界的广泛关注和重视,高中信息技术课程教学的有效性管理,打造高效的高
该学位论文从43株表现解钾活性的硅酸盐细菌菌株中筛选出两株具有拮抗活性的菌株S和S;探索了培养基组分和培养条件对两株菌生长和拮抗活性形成的影响,确定了两菌株生长和活性
在大型电力设备内部对于局部放电研究受到了广泛关注,如何能够在局部放电发生时对信号进行及时有效的捕捉并进行准确定位,对预防重大事故发生有重要意义。本课题通过研究电缆终端和接头中局部放电声信号传播规律,探究利用光纤法-珀局放超声传感器的电缆附件局放检测新方法。依据声波传导基本理论,利用声场有限元分析方法建立电缆终端和接头模型,仿真研究局放超声波在不同介质及界面处的耦合传播规律。重点分析电缆附件运行温度
通过抗原hCG的固相淘选,使展示抗原特异性单链抗体的重组噬菌体得到富集.用经过淘选的重组噬菌体颗粒感染大肠杆菌TG1,在辅助噬菌体M13K07作用下,获得重组噬菌体悬液.用分离
随着信息技术的进步发展,“微”时代悄然而至,微课教学更成为了当今教学的“重头戏”,其以精辟简洁的展现形式,不断受到广大教师和学生的好评和关注.在高中历史教学中,利用微
随着新媒体的发展,信息网络进入每个人的生活,上网人数和时间都在持续上升.查阅知识,下载资料,看视频,交朋友,玩游戏,购物,打车……不仅成年人,青少年也被包围其中,其成长深
本文通过对荣华二采区10
初中数学教学是初中课程体系中必修课程之一,占据极为重要的地位,能够锻炼学生的逻辑思维,学生的发散性思维,以及学生的独立思考能力等综合素质,能够为学生的全面发展做好良
从清华大学的厌气污水处理器以及水稻田等产甲烷菌环境中取样分离到20株产甲烷菌.通过初步鉴定,选取其中9株进行了16S rDNA序列分析,发现都属于甲烷螺菌属,其中大部分为已知
本文尝试通过VB教学中一典型“案例”教学的实施过程,探索案例教学法在初中VB教学中的应用,让学生体验并感受程序设计的魅力,消除程序设计的神秘感和恐惧感.