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肺癌是威胁人类最严重后种癌症,约占全部癌症发病率的20﹪-30﹪.全世界许多实验室都致力于肺癌的研究.以往我们实验室建成一株杂交廇细胞LC-1,它分泌的单抗突出的优越性是能与四种病理类型的肺癌(即肺腺癌,肺鳞癌,肺大细胞癌,肺小细胞癌)都能反应.但由于该单抗是鼠源性单抗,可能产生HAMA反应,限止了单抗LC-1的临床应用.我们应用了基因工程的手段去改造.该工作中还采用单链抗体的方法改造LC-1单抗.我们根据SOE的原理设计了linker引物:C TGG GGC CAA GGG ACC ACG GTC ACC GTC TCC TCA GGT GGA GGG GGT TCA GGC GGA GGT GGC TCT GGC GGT GGC GGA TCG GAC ATT GAG CTC ACC CAG TCT C.用该引物和VLFOR修饰LC-1单抗轻链可变区,让它带上(GGGGS)<,3>的连接肽和能与重链退火的一段序列,将修饰后的VL与等摩尔的VH做SOE得到单链抗体.单链抗体经三次选择/扩增的噬菌体-抗体库技术亲和力成熟后,随机挑取三个克隆测序,结果单链抗体实体基因部分仍然没变.将成熟的单链抗体装入表达质粒pPROEXHTb中,重组质粒转导入大肠杆菌KC8细胞中.实验表明单链抗体完全表达在包涵体中.包涵体蛋白用变性液(8 mol/Lurea,50 mmol/L Tris(pH8.0),300 mmol/L NaCl,10 mmol/L β-Merc)溶解,并用Ni-NTA柱子亲和纯化.纯化的单链抗体经变性/复性[用(4 mol/L urea,50mmol/LTris(pH8.0),1 mmol/L GSSG,0.1 mmol/L GSH)透析]后,竞争ELISA显示,复性的单链抗体具有较高的抗原结合活力.单链抗体分子量小,易穿透组织到达靶位点,血清中的半衰期短,廓清快,分子为一个基因,很利于基因工程操作,并且还能用噬菌体抗体库技术提高亲和力,且我们的体系中单链抗体的产量高,这为LC-1单抗的临床应用奠定了基础.