本研究课题依托于国家自然基金课题项目“益气活血方活性组分抑制糖尿病仓鼠心肌病心室重塑及细胞凋亡的机制”(编号:81173258)。主要在生脉散合丹参饮抗糖尿病心肌病大鼠心肌纤维化作用研究的基础上,对二者组合而成的益气活血方活性成分进行组方优化研究。文献研究显示气阴两虚为DCM基本证型,血瘀为主要兼夹证,所以益气养阴、活血化瘀为治疗之本,临床应应用生脉散合丹参饮治疗糖尿病合并心血管疾病研究较多,而其中中药活性单体成分在临床上存在多种剂型,能够使药物作用及药代动力学研究更加清晰,有利于中药现代化研究。适用于多因素、多水平试验研究的均匀设计方法,越来越多的应用于中药有效组分配伍研究中,并取得了一定的成果。目的:糖尿病心肌病(DCM)是在长期高糖状态下出现的特异性的病变,前期对生脉散合丹参饮的临床及实验研究有效的基础上,进一步对其有效组分进行研究,前期实验证明有效组分对糖尿病大鼠心肌纤维化及成纤维细胞(CFs)具有保护作用,本实验探索生脉散合丹参饮对DCM的作用机制,采用均匀设计方法,寻找抗糖尿病心肌纤维化作用的最佳配伍及配伍规律。方法:以抗心肌纤维化复方“生脉散合丹参饮”中6种已知的有效组分(人参总皂苷、麦冬多糖、五味子油、丹参酮ⅡA、檀香油、乙酸龙脑酯)为研究对象,运用链脲佐菌素(STZ)诱导SD大鼠糖尿病心肌纤维化模型,采用均匀设计法“6因子12水平表”分组设计,以反映大鼠心室重塑和心肌细胞凋亡的指标为筛选指标,经逐步回归分析获得“最佳配方”。各组治疗性给药4周后,麻醉大鼠剥离心脏,HE染色法观察心肌形态变化、苦味酸-天狼星红染色观察心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原变化、ELISA法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原含量变化;采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)测定心肌细胞凋亡指数(AI)、Westenblot检测凋亡基因Bax、Bcl-2和二者比值以及P53蛋白表达情况,通过各个指标所得到的回归方程进行最佳剂量配比的预测。结果:(1)通过观察心肌纤维化模型组大鼠心脏重量指数、心肌胶原含量、心肌凋亡指数、心肌形态学改变,模型组与正常组比较,差异具有统计学意义(P<0.05),且符合DCM病变特点,说明造模成功;(2)心肌Ⅰ型胶原含量筛选的A配方,得到回归方程:Y=26.704-0.01BF-2.05E-0.019BC,提示当麦冬多糖300mg,五味子油1mg,檀香油10mg,乙酸龙脑酯10mg时胶原增生最少,其中檀香油系数较大,系数为负,对Ⅰ型胶原增生具有抑制作用,发挥主效应作用,同时麦冬多糖与五味子油、乙酸龙脑酯均发挥协同作用,共同发挥抑制胶原增生作用;(3)以心肌Ⅲ型胶原含量为因变量进行多元线性回归,得出回归方程Y=6.188-0.003BE+0.057D+3.023C-0.069CD,提示最佳配比麦冬多糖 300mg,檀香油 10mg,五味子油0.25mg,丹参酮ⅡTA5mg,其中丹参酮ⅡA、檀香油发挥主效应作用,且二者可发挥协同作用,共同抑制Ⅲ型胶原增生,麦冬多糖与檀香油相互作用抑制胶原增生;(4)以 AI 为因变量进行多元线性回归分析得出回归方程:Y=0.663-0.018A+0.0001EF-0.224C,提示最佳配比人参总皂苷200mg,五味子油1mg,檀香油Omg,乙酸龙脑酯Omg,方程中A、C的系数均为负,所以二者的取值与AI呈负相关,而檀香油及乙酸龙脑酯与AI呈正相关。(5)以Bcl-2/Bax比值为因变量进行多元线性回归分析得出回归方程:Y=0.276-0.004D+1.05*E-4BE,提示最佳配比为麦冬多糖300mg,檀香油10mg,二者交互作用对Bcl-2、Bax表达具有调节作用,而丹参酮ⅡA未能体现协同作用。结论:(1)上述6种中药组分配伍后能有效发挥抗糖尿病心肌病大鼠心肌纤维化指标的作用,且针对不同病理机制发挥作用的主效应药物不同;(2)本实验采用均匀设计的方法研究中药有效组分配伍规律,为筛选抗糖尿病心肌纤维化中药有效组分最佳配伍复方研究提供了合适的方法。