猪苓亲缘关系分析及活性物质对番茄花叶病毒病作用效果

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猪苓是一种常见的真菌,具有极高的药用价值。[目的]本研究通过探索不同产地野生猪苓的亲缘性关系,不同培养方式扩大培养猪苓菌丝,并测定不同处理组中多糖、蛋白质和麦角甾醇的含量,以及用上述不同处理组针对番茄花叶病毒病的诱抗和防治作用效果,为猪苓的工业化扩大生产以及猪苓主要化学物质对番茄花叶病毒病的作用效果提供相应的理论基础。[方法]本文通过建立系统发育树,探究所采集的四地野生猪苓菌核的亲缘性关系,利用一些代料扩大培养猪苓菌丝,采用热水浸提法提取多糖、蛋白质以及麦角甾醇,利用苯酚-硫酸法、考马斯亮蓝法以及高效液相色谱HPLC测不同处理组上述物质的含量,最后再针对番茄苗,采用摩擦接种方法接种烟草花叶病毒TMV,通过喷施不同提取物,利用ELISA手段测得番茄叶片内烟草花叶病毒含量。本研究实验结果显示如下:1、综合三种系统发育树结果,采集的四地野生猪苓都相较于其他地区野生猪苓亲缘性关系较远,其中河南卢氏猪苓与山西省中阳县野生猪苓始终聚在一起,相较于陕西省野生猪苓、山西省和顺县两地的野生猪苓亲缘性关系更近,而且相较于其他地区野生猪苓亲缘性关系更远,所以可以推测出以上四地野生猪苓,尤其河南卢氏猪苓与山西省中阳县野生猪苓可作为野生猪苓资源保护区加以保护。2、猪苓发酵液、蜜环菌发酵液分别单独培养10d后接入灭好菌的代料中共同培养这一处理组中菌丝及菌核生长情况总体表现最好,菌丝生长密集,速度快,菌核数量多且大。3、在多糖含量测定中,五种不同处理组多糖含量从高到低依次为:混合发酵液>猪苓发酵液>猪苓菌核>混合发酵液菌丝体>猪苓菌丝体,其中混合发酵液处理组多糖含量为0.892 mg·ml-1,比多糖含量最低的猪苓菌丝处理组高0.6580 mg·ml-1;测得蛋白质含量测定与麦角甾醇含量结果相符,五种不同处理组蛋白质含量从高到低依次为:猪苓菌核>混合发酵液菌丝体>猪苓菌丝体>混合发酵液>猪苓发酵液,其中蛋白质含量最高的猪苓菌核处理组蛋白质含量为0.6810 mg·ml-1,相较于猪苓发酵液处理组,含量高出0.4920mg·ml-1。猪苓菌核麦角甾醇含量为0.3991 mg·ml-1,比麦角甾醇含量最低的处理组高出0.3960 mg·ml-1。猪苓发酵液所获得的菌丝生物量相较于混合发酵液菌丝体生物量少,分别为2.056g和2.550g。4、经过猪苓菌丝发酵液、猪苓蜜环菌混合发酵液和猪苓多糖提取物处理的番茄植株,其诱导抗病能力和防治效果都明显高于其它处理组,并且经处理的植株株高株重等生物量也有明显的提高,其中以猪苓多糖提取物处理组的植株防病和促生效果最为显著;诱抗处理中,10d时发生的病斑数相较于对照组,其抑制率达到59.7%,对病毒的抑制率达到47.82%。防效处理中,10d时发生的病斑数相较于对照组,抑制率达到48.6%,对病毒的抑制率达到29.96%。而猪苓麦角甾醇提取物和蛋白提取物对接种病毒的试验组植株无防病毒效果。
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