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目的尽早对胰岛素抵抗状态进行干预不仅是治疗2型糖尿病的关键,对预防高血压、代谢综合征及相关心血管疾病同样具有重要意义。在前期研究的基础上,考虑到胰岛素抵抗与机体慢性低水平炎症状态的密切相关性,基于SIRT1/NF-κB在炎症调节中的重要作用,本实验以遗传性胰岛素抵抗大鼠-ZDF大鼠为研究对象,研究电针对ZDF大鼠下丘脑SIRT1、乙酰化NF-κB表达及其下游炎症因子的影响,探讨电针通过调控中枢炎症改善胰岛素抵抗的分子机制,为临床运用电针防治胰岛素抵抗及其相关性疾病提供实验依据。方法采用7周龄雄性ZDF大鼠12只,同窝未变异背景对照瘦鼠(Zucker+/?)4只,以随机数字表法,将12只ZDF大鼠分为3组:模型对照组、非电针刺激组和电针组,每组4只。4只背景瘦鼠为空白对照组。电针和非电针刺激组,选取足三里、关元、中脘和丰隆四穴。电针干预方法:选用0.30×13mm规格不锈钢毫针,针刺深度为3-5mm,其中足三里和丰隆直刺,关元向剑突方向斜刺,中脘向耻骨联合方向斜刺。针刺后接通韩式电针仪,强度为1mA,频率为2Hz,每次通电10分钟,每周3次,其中足三里和丰隆两穴为左右交替采用,共治疗3周。非电针刺激组进针后连接韩式电针仪,但不通电。除对电针组和非电针刺激组大鼠进行干预之外,对空白对照组及模型对照组也在同样的时间进行抓取固定。干预期间,每周测量并记录进食量、体重、空腹血糖和餐后血糖。干预结束后,取血清测hs-CRP水平,取下丘脑组织,采用免疫印迹法检测SIRT1、乙酰化NF-κB p65及其下游炎性因子TNF-α和IL-6蛋白表达,免疫荧光双标法测定SIRT1及乙酰化NF-κB p65蛋白在下丘脑共表达情况,并采用实时荧光定量PCR测定SIRT1、TNF-α和IL-6的基因表达水平,并对数据进行统计学分析。结果1.电针对zdf大鼠胰岛素抵抗进食量、体重、血糖及血清hs-crp的影响第0周时,模型对照组、非电针刺激组及电针组大鼠进食量无明显差异(p>0.05),而空白对照组进食量则明显少于另外3组(p<0.01)。第1周时,非电针刺激组和电针组大鼠进食量虽少于模型对照组,但差异无统计学意义(p>0.05)。治疗2周后,电针组大鼠进食量明显少于模型对照组(p<0.01),非电针刺激组进食量较模型对照组也有所减少(p<0.05)。治疗3周后,电针组和非电针刺激组与模型组相比,进食量显著减少(p<0.01)。第0周时,模型对照组、非电针刺激组和电针组大鼠体重无明显差异,具有可比性,而空白对照组大鼠体重则明显轻于另外3组(p<0.01)。治疗1周后,非电针刺激组和电针组大鼠体重虽少于模型对照组,但差异无统计学意义(p>0.05)。治疗2周后,电针组大鼠体重较模型对照组明显减少(p<0.05),非电针刺激组大鼠体重较模型对照组无明显差异(p>0.05)。治疗3周后,电针组大鼠体重仍显著小于模型对照组(p<0.05),而非电针刺激组大鼠体重虽较模型对照组有所减少,但差异缺乏统计学意义(p>0.05)。第0周时,模型对照组、非电针刺激组和电针组大鼠空腹血糖明显高于空白对照组(p<0.05),而前三组大鼠空腹血糖之间无明显差异(p>0.05)。第1周和第2周时,各组大鼠空腹血糖均有上升,且空白对照组大鼠空腹血糖明显低于其他三组(p<0.01),而其他三组空腹血糖无明显差异(p>0.05)。第3周时,电针组大鼠空腹血糖较模型对照组明显下降(p<0.05),非电针刺激组大鼠空腹血糖虽有下降,但无统计学意义(p>0.05)。第0周时,模型对照组、非电针刺激组和电针组大鼠餐后血糖无明显差异,且空白对照组大鼠餐后血糖明显低于其他三组(p<0.01)。治疗1周后,非电针刺激组和电针组大鼠餐后血糖虽低于模型对照组,但无显著性差异(p>0.05)。治疗2周和3周后,非电针刺激组和电针组大鼠餐后血糖明显低于模型对照组(p<0.05)。干预结束后,与空白对照组比较,模型对照组zdf大鼠的血清hs-crp水平明显升高(p<0.05),而非电针刺激组和电针组与之相比则无明显差异;与模型对照组相比,电针组zdf大鼠血清hs-crp则明显降低(p<0.05)。2.电针对zdf大鼠下丘脑sirt1和乙酰化nf-κbp65蛋白表达水平的影响非电针刺激组和模型对照组大鼠下丘脑sirt1蛋白表达水平明显低于空白对照组(p<0.01),而电针组大鼠与空白对照组相比,则无明显差异(p>0.05)。与模型对照组相比,空白对照组、非电针刺激组和电针组大鼠下丘脑乙酰化nf-κbp65蛋白表达水平明显降低(p<0.01),且空白对照组大鼠乙酰化nf-κbp65表达水平显著低于非电针组(p<0.05),而与电针组大鼠无明显差异(p>0.05)。3.电针对zdf大鼠下丘脑sirt1和乙酰化nf-κbp65蛋白表达部位和关系的影响空白对照组和电针组sirt1的细胞个数多于乙酰化nf-κbp65,而模型对照组和非电针刺激组sirt1的细胞个数则明显少于乙酰化nf-κbp65。从sirt1/ac-nf-κbp65的比值来看,空白对照组和电针组大于1,且空白对照组表达差异更为明显,而模型对照组和非电针刺激组比值小于1,且模型对照组表达差异更小。从高倍镜下可以观察到sirt1和乙酰化nf-κbp65在下丘脑的表达较为丰富,且多为核表达。在部分细胞内存在sirt1和nf-κbp65共定位,其共定位在细胞核。4.电针对zdf大鼠下丘脑sirt1mrna表达水平的影响与空白对照组比较,模型对照组、非电针刺激组和电针组sirt1mrna表达水平较低(p<0.01),而与模型对照组比较,电针组sirt1mrna表达水平则明显升高(p<0.01)。5.电针对ZDF大鼠下丘脑TNF-α和IL-6蛋白表达的影响与空白对照组比较,模型对照组ZDF大鼠TNF-α和IL-6蛋白表达水平明显升高(P<0.01),而与模型对照组比较,非电针刺激组和电针组大表达水平则明显降低(P<0.01)。6.电针对ZDF大鼠下丘脑TNF-α和IL-6 mRNA表达水平的影响与空白对照组比较,模型对照组、非电针刺激组和电针组ZDF大鼠TNF-α和IL-6mRNA表达水平明显升高(P<0.01),而与模型对照组比较,非电针刺激组和电针组大鼠表达水平虽有所降低,但缺乏统计学意义(P>0.05)。结论1.电针干预ZDF大鼠可以起到控制饮食、减轻体重、降低空腹血糖和餐后血糖的作用,且电针和非电针刺激的干预结果明显无差异,提示两者均可以起到减轻胰岛素抵抗的作用。2.电针干预ZDF大鼠可以显著降低外周hs-CRP水平,提示电针具有改善机体系统性炎症的作用。3.电针可以通过上调ZDF大鼠下丘脑SIRT1表达,进而去乙酰化NF-κB,起到调控其下游相关基因表达的作用。4.电针可以通过ZDF大鼠下丘脑SIRT1/NF-κB途径,降低下游炎症因子TNF-α和IL-6表达水平,减轻中枢炎症。5.从电针和非电针刺激的综合效应来看,电针的效果更好,电针促进SIRT1表达,从而去乙酰化NF-κB,抑制其通路的激活及其下游相关炎症因子的释放,降低中枢炎症因子水平,,这可能是其改善胰岛素抵抗的重要分子机制。