猪HOXA11基因转录调控研究

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liyunfei369
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
母猪产仔数的高低是衡量猪繁殖性状的重要指标,也是决定企业经济效益的关键因素,但由于猪本身的制约性,使得遗传改良进展缓慢。随着基因工程技术的发展,利用转基因技术培育新品种已成为如今育种工作的主要途径,而动物种质资源的创新也进入到了一个全新的发展时期。研究表明,HOXA11基因在子宫内膜形态的构建、子宫周期性形态的变化、子宫容受性的建立、胚胎的着床及附植等方面发挥着重要的作用,且HOXA11基因受雌激素、孕激素等多种因素的调控。本实验选取与猪繁殖性状密切相关的HOXA11基因作为研究对象,对其转录调控机制进行初步分析研究,主要获得以下结果:(1)利用比较基因组学和RT-PCR的方法,克隆了猪HOXA11基因的cDNA序列,得到该基因的CDS全长,共951bp。同时分析了该基因的结构,猪HOXA11基因含有两个外显子,72bp的5’UTR和1576bp的3,UTR。(2)利用RT-PCR的方法,检测了猪HOXA11基因在成年梅山猪的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、小肠、肌肉、淋巴和子宫内膜10个组织中的,结果显示猪HOXA11基因在子宫内膜特异表达,在其他几个组织中几乎不表达。(3)在大白和梅山这两个品种的四个不同时期(发情15天、妊娠15天、妊娠26天、妊娠50天)对HOXA11基因的表达情况进行了检测,结果显示在大白猪中,妊娠15天时该基因的表达量要高于其他时间点,在妊娠50天时,表达量最低;而在梅山猪中,从发情15天一直到妊娠26天,HOXA11基因持续高表达,但在妊娠50天时,该基因的表达量也同样降低。(4)通过生物信息学的方法,克隆了猪HOXA11基因的启动子序列,并构建了5’端缺失启动子载体,分析双荧光素酶活性检测结果显示,猪HOXA11基因2kb启动子载体具有较高的启动活性,是pGL3-Basic空载体活性的5倍;对该基因的启动子序列进行预测分析后发现,该启动子可能与转录因子AP1、c-JUN、OCT-1、 GATA-3有较高的结合活性;将该启动子载体分别转染PK15、C2C12和Ishikawa细胞系,分析结果后发现该启动子并非子宫内膜特异表达,在其他两种细胞系中也有表达,但活性低于子宫内膜的活性。(5)孕酮体外注射怀孕小鼠,分别采用2mg和4mg的剂量,以未处理的正常怀孕小鼠作为阴性对照,分别在怀孕4天、5天和6天采集小鼠子宫内膜样品,分析HOXa11基因的表达情况,结果显示体外孕酮刺激可提高小鼠子宫内膜HOXa11基因的表达,且2mg的效果要好于4mg,但在怀孕6天,孕酮刺激所产生的差异不显著。分析该基因的本底表达量发现,怀孕4天和5天,小鼠HOXa11基因的表达量要高于怀孕6天,但差异并不显著。以上的研究结果,可以为探讨猪HOXA11基因的转录调控机制提供初步的实验依据,并为转基因载体的构建以及转基因动物的制备提供实验材料。
其他文献
本试验以银川地区日光温室、塑料大棚促早栽培葡萄、桃、李子主栽品种为试材,通过对棚内外气象因子的连续采集,采用犹它模型估算了上述品种的需冷量及适宜扣棚升温时间;比较了日
β-乳球蛋白(β-LG)是乳清中的主要蛋白,具有改变牛乳热稳定性、与脂肪酸及风味物质结合、抗癌等生物学活性以及良好的搅打起泡性、凝胶性、成膜性等加工特性,被广泛应用于食品
布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起的一类动物源性人兽共患病,在世界范围内广泛流行,尤其是发展中国家。近几年回升势头迅猛。布鲁氏菌主要毒力表现在能侵入宿主细胞并在其中生存增殖
本试验通过添加不同种类的有机硒,研究硒对娟姗牛以及对后续乳制品的影响。首先在娟姗牛的日粮中添加一定剂量的不同有机硒源,探索硒对娟姗牛生产性、生理状况的影响以及乳中硒