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研究目的:寻找在结肠癌中与DHX32基因相关的microRNA,并将其应用于结肠癌的临床诊断,评估其作为结肠癌血浆诊断标志物的应用价值。研究方法:1.将DHX32敲低的结肠癌细胞株及其对照细胞株的细胞裂解液进行小RNA高通量测序,获得DHX32相关的差异候选microRNAs;2.通过18对结肠癌病人\正常对照血浆进行预实验,从候选microRNAs中进一步挑选出在结肠癌病人与正常对照组血浆中表达水平显著差异的microRNAs;3.通过精密度实验、琼脂糖凝胶电泳、标准曲线等实验对SYBgreen染料法进行方法学验证及评估;4.将挑选出的microRNAs进行大样本检测,汇总分析结肠癌病人的各项临床病理数据和常用结肠癌血浆标志物的表达水平,评估所挑选出的DHX32相关microRNA在结肠癌中的诊断价值。研究结果:1.通过高通量测序获得38种与DHX32相关的microRNAs(|log2(Fold Change)|>=1并且P<0.05);2.对高通量测序技术获得的38种microRNAs进行预实验筛选,其中miR-373-3p在结肠癌组与对照组的血浆中表达有差异(P<0.05);3.SYBgreen染料PCR法检测血浆miR-373-3p及cel-miR-39的扩增效率分别达到100.716%和97.398%。重复性良好,批内变异系数和批间变异系数均小于5%;4.血浆miR-373-3p在结肠癌组和结肠良性疾病组的表达量均高于对照组(P<0.001)。同时,结肠癌组与结肠良性疾病组中miR-373-3p的表达水平也具有明显的差异(P<0.001)。结肠癌不同分期的血浆miR-373-3p表达水平均高于对照组,而不同TMN分期之间血浆miR-373-3p的表达量无显著差异;5.血浆miR-373-3p与结肠癌病人的年龄、性别、TNM分期、分化程度、脉管浸润、神经侵犯、淋巴结侵犯、远处转移和癌组织类型均无明显的相关性。20位结肠癌病人术前、术后血浆miR-373-3p的表达结果显示结肠癌病人术后血浆miR-373-3p水平显著下降(P<0.001);6.ROC曲线分析表明,血浆miR-373-3p的cut-off值为-5.721时,诊断结肠癌的敏感性、特异性、阴性预测值和阳性预测值分别为78.16%、69.41%、75.64%、72.34%;当cut-off值为-5.722时,血浆miR-373-3p诊断早期结肠癌的诊断敏感性、特异性、NPV和PPV分别为86.36%、69.41%、75.64%和72.34%;7.对于结肠疾病,当血浆miR-373-3p的cut-off值为-5.721时,诊断敏感性、特异性、NPV和PPV分别为86.04%、69.41%、75.64%、81.81%;8.血浆miR-373-3p与CEA、CA-125、CA-199进行联合诊断结肠癌时的ROC曲线下面积为0.926,当cut-off值为0.055时,诊断敏感性、特异性、PPV和NPV为81.61%、94.12%、93.42%和83.33%。研究结论:1.miR-373-3p是一种与DHX32相关的microRNA。2.血浆miR-373-3p具有作为结肠癌及结肠疾病辅助诊断标志物的潜力,并且在早期结肠癌的诊断价值高于临床常见的结肠癌标志物。3.血浆miR-373-3p与临床常用结肠癌血浆标志物(CEA、CA-125、CA-199)的联合诊断能极大提升结肠癌诊断的敏感性,具有一定的临床价值。4.血浆miR-373-3p在结肠癌术后表达下降,提示血浆miR-373-3p或许能作为结肠癌术后疗效的判断指标。