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布鲁氏菌病(Brucellosis)是由胞内寄生菌布氏杆菌属侵入机体引起的一种人和动物都能感染的细菌性传染病,简称布病。世界上大部分地区都有布鲁氏菌病的发生,成为严重威胁人类健康和经济发展的问题。近年来,布鲁氏菌病的流行越来越严重,我国也不例外,进行布鲁氏菌病的防控显得尤为重要,免疫接种是预防布鲁氏菌病的一个重要手段,目前常用的疫苗主要是布鲁氏菌弱毒活疫苗,这些疫苗虽具有良好的保护能力,但其也存在不足之处,如具有一定毒性、易感染人,而且干扰血清学检测,导致无法区分自然感染动物与免疫动物等,因此,研究一种更好的布病新型疫苗越来越重要。乳酸乳球菌表达系统是一种安全、高效的表达系统,经常应用于亚单位疫苗的制作,本研究将布鲁氏菌Omp10、Omp28、L7/L12三个优势抗原基因串联后导入乳酸乳球菌表达系统中,构建能够表达布鲁氏菌融合蛋白Omp10-Omp28-L7/L12的乳酸乳球菌免疫制剂。乳酸乳球菌是自然界中常见的益生菌种,是公认的安全级微生物,且乳酸乳球菌可以长时间定植在肠道,刺激机体黏膜免疫反应从而引起全身免疫反应。因此本试验选用乳酸乳球菌表达系统,首先利用PCR技术扩增公司合成的Omp10-Omp28-L7/L12融合基因,然后通过DNA重组技术将Omp10-Omp28-L7/L12融合基因与乳酸乳球菌表达载体pNZ8148连接,最后通过电转化的方式转入乳酸乳球菌NZ9000感受态细胞中。经乳酸链球菌素nisin诱导后,分别用鼠抗His标签抗体、Omp10多克隆抗体、Omp28多克隆抗体、L7/L12多克隆抗体作为一抗,HRP标记羊抗鼠IgG作为二抗对表达产物进行Western blot试验,结果显示均出现了大小为55.4kDa的特异性条带,说明布鲁氏菌Omp10-Omp28-L7/L12融合蛋白表达成功。将重组乳酸乳球菌pNZ8148-Omp10-Omp28-L7/L12/NZ9000通过灌胃的方式免疫SPF BALB/c小鼠,第0-4d进行首次免疫,连续免疫4d,并在10-14d进行加强免疫,在首免后第0d、7d、14d、21d、28d、35d每组随机取3只小鼠采集血液和小肠,通过检测布鲁氏菌特异性抗体IgG、肠粘膜sIgA、血清IL-2、IL-4、IFN-γ水平以及外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞数目等指标进行免疫效果分析。结果表明,重组乳酸乳球菌pNZ8148-Omp10-Omp28-L7/L12/NZ9000能诱导机体产生特异性血清IgG抗体和小肠黏膜sIgA抗体,而且能使IL-2、IL-4和IFN-γ细胞因子水平提高,促使CD4+、CD8+T淋巴细胞数目增高。综上所述,重组乳酸乳球菌不仅能够表达布鲁氏菌Omp10-Omp28-L7/L12融合蛋白,而且能够使小鼠产生体液免疫反应和细胞免疫反应。为进一步研制布鲁氏菌病新型疫苗提供了试验依据。