薏仁多糖的提取、纯化及诱导A549细胞凋亡的研究

来源 :天津科技大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:zolono188
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薏仁(Adlay Seed)是禾木科植物薏米的干燥成熟种仁,是常用的中药,又是普遍、常吃的食物,作为一种药食兼用的植物,其中的活性成分薏仁多糖具有降血糖、抗氧化等作用。本研究以薏仁为原料,研究薏仁多糖的结构、性质以及薏仁多糖诱导A549细胞凋亡的作用,为拓展薏米多糖的应用提供理论依据和基础数据。本研究旨在探讨薏仁多糖诱导A549细胞凋亡的作用。通过水提醇沉法提取粗的薏仁多糖,再通过脱蛋白质,脱色,透析,DEAE-52离子交换柱层析,葡聚糖凝胶过滤层析得到薏仁多糖组分。采用紫外全波长扫描和高效液相色谱检测,结果显示薏仁多糖中不含核酸、蛋白等杂质;检测多糖的比旋光度为+180;多糖经糖醇乙酸酯衍生化后采用气相色谱法对其单糖组成进行研究,薏仁多糖主要由鼠李糖、木糖、阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖组成;采用凝胶过滤层析法测定薏仁多糖相对分子质量为1.2x 104;红外光谱法对结构进行初步分析显示薏仁多糖是酸性β-D-吡喃葡萄糖。将薏仁多糖作用于A549细胞检测结果为:采用MTT测定A549细胞的存活率,MTT测得薏仁多糖对A549细胞有明显的生长抑制作用;扫描电镜观察细胞形态,扫描电子显微镜观察到测试组A549细胞产生凋亡小体;流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡率,流式细胞仪分析薏仁多糖处理导致A549细胞S期阻滞,并产生凋亡峰,凋亡率与多糖浓度呈正相关;用激光共聚焦显微镜分析线粒体膜电位的变化,分析显示细胞的线粒体膜电位下降;反转录PCR测定半胱氨酰天冬氨酸酶-3和半胱氨酰天冬氨酸酶-9两种基因相对表达量,反转录PCR结果表明与对照组比较,测试组半胱氨酰天冬氨酸酶-3和半胱氨酰天冬氨酸酶-9基因表达量上升;免疫印迹实验分析半胱氨酰天冬氨酸酶-3和半胱氨酰天冬氨酸酶-9两种蛋白的相对表达量,免疫印迹实验分析半胱氨酰天冬氨酸酶-3和半胱氨酰天冬氨酸酶-9两种蛋白的相对表达量也提高;单细胞凝胶电泳检测细胞DNA变化,通过DNA彗星实验薏仁多糖可延长尾距,表明DNA断裂破碎。该实验提取的薏仁多糖是一种新的多糖,为首次从薏仁中分离得到,可以为探讨薏仁多糖的药理活性提供依据。通过细胞实验发现这种薏仁多糖能够有效地诱发A549癌细胞凋亡。
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