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目的:研究EBER和IL-17、IL-17R在鼻咽黏膜慢性炎及鼻咽癌组织中表达的意义及关系,研究recombinant human IL-17细胞因子对鼻咽癌细胞系C666-1和CNE-2Z细胞活性的影响,探讨鼻咽癌中EB病毒潜伏感染与免疫细胞因子IL-17/IL-17R信号轴的关系。
方法:采用原位杂交和免疫组化SP法检测92例鼻咽癌、15例鼻咽黏膜慢性炎中EBER和IL-17R、IL-17蛋白的表达。免疫细胞化学和Western blot方法检测鼻咽癌细胞系C666-1和CNE-2Z细胞IL-17R蛋白的表达。分别用不同浓度recombinanthuman IL-17细胞因子(0.1ng/mL、0.5ng/mL、1ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、500ng/mL)作用于鼻咽癌细胞系C666-1和CNE-2Z细胞24h、48h、72h,CCK8法检测细胞增殖活性。
结果:⑴EBER和IL-17、IL-17R蛋白在57例鼻咽癌原发灶中的表达阳性率分别为91.23%(52/57)、63.16%(36/57)、77.19%(44/57),而在15例鼻咽黏膜慢性炎组织中的阳性表达率分别为0%(0/15)、33.33%(5/15)、26.7%(4/15)。组间差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。⑵92例鼻咽癌组织中,EBER在各临床病理因素分组中均高表达,组间差异均无统计学意义(P>0.05)。IL-17蛋白在鼻咽癌原发灶转移组(P<0.01)、复发组(P<0.05)及TNMⅢ、Ⅳ期组中(P<0.05)均高表达,组间差异均有统计学意义。IL-17R蛋白在鼻咽癌复发组高表达,组间差异有统计学意义(P<0.05)。⑶92例鼻咽癌组织中,EBER与IL-17蛋白表达呈正相关(r=0.219,P<0.05);EBER与IL-17R蛋白表达呈显著正相关(r=0.339,P<0.01)。IL-17与IL-17R蛋白表达呈显著正相关(r=0.684,P<0.01)。⑷免疫细胞化学法和Western blot均可检测到鼻咽癌细胞系C666-1和CNE-2Z细胞中有IL-17R蛋白呈膜阳性表达。⑸分别用50ng/mL(P<0.05)、100ng/mL和500ng/mL(P<0.01)浓度recombinanthuman IL-17作用于C666-1细胞24h,细胞活性均明显高于对照组。分别用100ng/mL(P<0.05)和500ng/mL(P<0.01)浓度recombinant human IL-17作用于C666-1细胞48h,细胞活性均明显高于对照组。分别用50ng/mL和500ng/mL浓度recombinant human IL-17作用于C666-1细胞72h,细胞活性均明显高于对照组(P<0.05)。⑹用各种浓度recombinant human IL-17作用于CNE-2Z细胞24h,对细胞活性无明显影响(P>0.05)。分别用100ng/mL(P<0.05)和500ng/mL(P<0.01)浓度recombinant human IL-17作用于CNE-2Z细胞48h,细胞活性均明显高于对照组。分别用50ng/mL、100ng/mL和500ng/mL浓度recombinant human IL-17作用于CNE-2Z细胞72h,细胞活性均明显高于对照组(P<0.05)。
结论:①鼻咽癌组织中EBER和IL-17蛋白、IL-17R蛋白均呈高表达,三者表达有正相关性。鼻咽癌原发灶中淋巴细胞高表达IL-17蛋白与鼻咽癌复发、转移及临床TNM分期进展均有关,IL-17蛋白促肿瘤进展的作用可能与鼻咽癌细胞IL-17R蛋白表达呈正相关。②recombinant human IL-17细胞因子对体外培养的鼻咽癌细胞系C666-1和CNE-2Z细胞均有促增殖作用,recombinant human IL-17对鼻咽癌CNE-2Z细胞的促增殖作用呈时间和剂量依赖性。③鼻咽癌中EBV潜伏感染与免疫细胞因子IL-17/IL-17R信号轴之间有相关性。EBV潜伏感染可能通过激活鼻咽癌组织中的淋巴细胞分泌IL-17以及上调鼻咽癌细胞IL-17R蛋白的表达,促进癌细胞增殖、浸润、侵袭及转移能力。IL-17/IL-17R信号轴有可能成为鼻咽癌免疫治疗的靶点。