传染性喉气管炎和新城疫是鸡的主要呼吸道疾病，给养鸡业造成了巨大的损失，是现代养鸡业必须防疫的疾病。尽管传统方法制备的疫苗在疾病的控制上曾经发挥重要的作用，但随着人们对疾病清除计划呼声的日渐高涨，特别是食品安全性意识的提高，呼唤着新型疫苗来替代常规疫苗。在这方面，禽痘病毒载体疫苗以其特有的优势和竞争力吸引了各国科学家的注意，构建了许多表达禽类病原体主要免疫原基因的重组禽痘病毒，而且已有部分产品投入使用。构建表达多个病原体基因的重组禽痘载体疫苗对于面临多种疾病威胁的养禽业来说尤其具有重要的意义。 本试验将新城疫病毒F48E9株F基因置于LP₂EP₂启动子控制之下，构建禽痘病毒转移载体，之后与以前构建的表达ILTV gB基因的重组禽痘病毒（rFPV-ILTVgB）共转染鸡胚成纤维细胞，采用蚀斑表型反向筛选的方法（即从兰色的背景反向筛选白色蚀斑），筛选并纯化得到表达F基因的重组禽痘病毒（rFPV-NDV F），间接免疫荧光试验证明NDV F蛋白在rFPV-NDVF感染的鸡胚成纤维细胞中获得表达。 以本实验室构建的含有ILTV gB基因的禽痘病毒转移载体为基础，构建禽痘病毒转移载体pSY-gB-F，该载体含有P7.5启动子控制下的F基因和LP₂EP₂启动子控制下的gB基因。将pSY-gB-F和禽痘病毒疫苗株S-FPV-017株公转染鸡胚成纤维细胞，通过蓝斑试验筛选出重组禽痘病毒，并进行克隆纯化，将其命名为rFPV-gB-F。PCR方法证明rFPV-gB-F基因组中含有ILTV gB基因和NDV F基因；Dot-ELISA、间接免疫荧光试验与Western-blot试验分别证明NDV F基因和ILTV gB基因能在rFPV-gB-F感染的鸡胚成纤维细胞中表达。 为了检测重组病毒对SPF鸡的保护效果，将90只四周龄的SPF鸡分为六组，分别免疫rFPV-gB-F（20只）、ND弱毒疫苗（La Sota，10只）、ILT弱毒疫苗（10只）、rFPV-ILTV gB（10只）、S-FPV-017（20只），同时设立非免疫对照鸡（20只）。抗体检测结果表明rFPV-gB-F免疫组能诱发机体产生抗新城疫病毒的抗体，但抗体水平明显低于La Sota免疫组，S-FPV-017免疫组和非免疫对照组没有产生抗新城疫病毒抗体。rFPV-gB-F和rFPV-ILTVgB免疫后诱发抗ILTV抗体的水平相当，在免疫后三周呈阳性，但低于ILT弱毒疫苗免疫组，免疫后四周，以10³ ELD₅₀ F48E9株NDV强毒对rFPV-gB-F免疫鸡（10只）、La Sota免疫鸡（10只）、S-FPV-017免疫鸡（10只）以及非免疫对照鸡（10只）进行肌肉注射攻击。La Sota免疫鸡获得完全保护，rFPV-gB-F免疫组的部分鸡（2／10）抵抗ND强毒的攻击，免于死亡，而且发病和死博土学位论文 摘 要 甲同农业科学院亡时间明显滞后于对照组。S－FPV－017兔疫组和非免疫对照组则完全没有获得保护。兔疫后五周，用 105 EID50 ILT WG株强毒对 OFPV唱BF兔疫鸡门 只人 ILT弱毒疫苗免疫鸡（10只）、FPV－I厂V gB e疫鸡（10只）、S－FPV－of 7兔疫鸡（10只）以及非免疫对照鸡门 只)攻击。结果显示 rFPV宫BF、rFPV二LTV gB和 ILT弱毒疫茵兔疫鸡对死亡的保护均为10／10，S．FPV－017免疫组与非免疫对照组均有S／10的死亡率：V的分离和P＊R检测结果表明rFP＊名F具有和ILT商品化弱毒疫苗同样的保护效果。 综上所述，表达 NDV F和 ILTV gB双基因重组禽痘病毒接种 SPF鸡，可使形种鸡产主兔疫反应，对ILTV强毒的攻击产生完全的保护，并且对NDV攻击有一定的保护作用。本研究为今后构建高效的三价重组病毒载体疫苗奠定了基础。