论文部分内容阅读
目的:骨髓基质细胞(bone marrow stromal Cells,BMSCs)作为一种成体干细胞,具有一定的自我更新、高度增殖和多向分化的潜能。在适宜的条件下,可以诱导分化为成骨细胞及脂肪细胞。BMSCs来源方便,取材较容易,体外培养和扩增的技术条件简便。本课题在建立大鼠BMSCs体外分离、培养、纯化及扩增体系的基础上,研究BMSCs在体外培养中的生物学特性,以及向成骨细胞及脂肪细胞分化的能力,为下一步人骨髓基质细胞的体外分离培养奠定基础,同时为进一步在分子水平研究激素性骨质疏松的病因及治疗做探索和准备。
方法:本实验采用密度梯度离心法,利用BMSCs贴壁速率快的特点,使用percoll淋巴细胞分离液分离后,接种培养。反复换液纯化。经原代及传代培养扩增BMSCs后,研究其在体外培养中的生长曲线等生物学特性及对其鉴定,在此基础上,使用不同浓度糖皮质激素(10-6、10-7、10-8mol/L)配合成骨及成脂诱导培养基诱导BMSCs向成骨细胞及脂肪细胞分化,进行钙结节染色、碱性磷酸酶染色和油红O染色对成骨细胞及脂肪细胞进行鉴定。
结果:1.密度梯度离心法分离纯化得到BMSCs,原代培养14天达70-80%后传代,至3代时细胞趋于一致,2.本实验采用不同浓度糖皮质激素配合成骨及成脂诱导培养基诱导BMSCs向成骨细胞及脂肪细胞分化,观察细胞胞浆内有形态学的变化,免疫组织化学检测验证确实为成骨细胞及脂肪细胞。
结论:1.在本实验,密度梯度离心法分离纯化骨链基质细胞易于获得,成活率较高,增殖稳定,原代呈多形性,至三代形态趋于一致。2.在体外不同浓度糖皮质激素配合成骨及成脂诱导培养基可以诱导BMSCs向成骨细胞及脂肪细胞分化,分化过程中有细胞形态变化,同时有特异性标志物钙结节染色、碱性磷酸酶染色和油红O染色阳性的充分验证。3.成年大鼠骨髓中存在具有多分化潜能的BMSCs,易于体外扩增,在一定条件下可向成骨细胞及脂肪细胞分化,从而在分子水平为激素性骨质疏松的病因及治疗做有意义的探索和准备。