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目的:鉴于丹参酮化合物有抗肿瘤的作用,本实验课题主要检测丹参酮类化合物(二氢丹参酮I、TanⅡA、CPT及Tan I)作用于T细胞淋巴瘤细胞株(Jurkat)的增殖抑制、周期阻滞和诱导凋亡作用,并在此基础上探讨NF-κB、MAPK及PI3K三条信号通路在介导丹参酮类化合物对整个血液系统恶性肿瘤细胞(多发性骨髓瘤细胞株U266、髓系白血病细胞株NB4及K562、T细胞淋巴瘤细胞株Jurkat)的增殖抑制、诱导凋亡及周期阻滞中的作用。方法:(1)体外培养Jurkat细胞。刺激Jurkat细胞株的每种丹参酮类化合物设计六个浓度梯度(1.25、2.5、5、10、20、30μmol/L),将实验组分为24个组。以等质量的六个浓度梯度的柔红霉素(0.7、1.4、2.8、5.6、11.2、16.8μmol/L)刺激Jurkat细胞株作为阳性对照组,同时设一个阴性对照组。采用CCK8法分别检测培养24h、48h、72h的上述各组细胞的抑制率。PI单染法检测20μmol/L的药物作用于Jurkat细胞株24h后对细胞周期阻滞的影响,Annexin V/PI双染法检测20μmol/L的药物作用于Jurkat细胞24h后对诱导凋亡的作用。(2)培养血液恶性肿瘤细胞株(NB4、K562、U266、Jurkat),收集经20μmol/L的4种丹参酮类化合物刺激24h后的NB4、K562、U266、Jurkat细胞,抽提出总蛋白之后用BCA法检测其浓度符合要求则置-80℃保存备用,然后用Westernblot方法分别检测上述4种细胞的NF-κB、MAPK及PI3K三条信号通路蛋白表达。结果:1.二氢丹参酮I、TanⅡA、CPT及Tan I对Jurkat细胞株均有明显的增殖抑制作用,且作用效果呈时间和剂量依赖性。四种丹参酮化合物作用于Jurkat细胞株:24h,半数有效抑制浓度(IC50)分别为16.40、12.53、49.47、54.19μmol/L;48h,IC50分别为8.73、7.28、38.89、15.66μmol/L;72h,IC50分别为2.95、2.65、17.43、10.28μmol/L。2.流式细胞术检测20μmol/L的四种丹参酮药作用于Jurkat细胞株24h后周期阻滞作用。与空白对照细胞组比较,四种丹参酮类化合物作用于Jurkat细胞株后,除Tan IIA组外,二氢丹参酮I组、CPT组、Tan I组的G0/G1期细胞比例均明显增加,P<0.01;S期与G2/M期细胞减少,CPT组与空白对照细胞组的S期细胞比例相当,P>0.05,无显著差异;二氢丹参酮组对Jurkat细胞株的作用最强。Tan IIA组的S期细胞比例增加,G0/G1期和G2/M期的细胞比例减少。3.流式细胞术检测20μmol/L的四种丹参酮药物作用于Jurkat细胞株24h后诱导凋亡作用。与空白对照细胞组比较,四种丹参酮类化合作用于Jurkat细胞株后,二氢丹参酮I组、TanⅡA组、CPT组及Tan I组早期凋亡细胞比率、晚期凋亡和坏死细胞比率均明显增高,P<0.01。四种丹参酮类化合物中,二氢丹参酮对Jurkat细胞株作用最为显著,其次为Tan IIA组>Tan I组>CPT组,CPT组对Jurkat细胞株的作用最弱。4.Westernblot方法分别检测NB4、K562、U266、Jurkat经20μmol/L的4种丹参酮类化合物刺激24h后对NF-κB、MAPK及PI3K三条信号通路蛋白表达显示:丹参酮类化合物可明显抑制血液恶性肿瘤细胞株NF-κB和PI3K两条信号通路,但对MAPK信号通路没有作用。结论:1、丹参酮类化合物可以抑制Jurkat细胞株的生长活力,其效应呈剂量及时间依赖性。2、增殖抑制作用最强的二氢丹参酮I与等质量的柔红霉素比较,分别作用24h和48h后二氢丹参酮I对Jurkat细胞株的增殖抑制作用明显弱于柔红霉素;作用72h后,两药对Jurkat细胞株增殖抑制作用相当。3、丹参酮类化合物作用于Jurkat细胞株,均有周期阻滞及诱导凋亡作用,且以二氢丹参酮组作用最强。4、丹参酮类化合物可以影响Jurkat细胞株的周期分布,二氢丹参酮I组、CPT组及Tan I组将Jurkat细胞株阻滞于G0/G1期,Tan IIA组将其阻滞于S期。5、丹参酮类化合物作用于血液恶性肿瘤细胞株(K562、NB4、U266、Jurkat)可以明显抑制PI3K、NF-κB两条信号通路蛋白的表达,介导血液恶性肿瘤细胞的增殖抑制、周期阻滞及诱导凋亡;对MAPK信号通路无明显作用。