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家蚕是重要的经济昆虫,更是经典遗传学研究的模式生物之一。作为真核生物,家蚕生物反应器有着原核生物不可比拟的优点,利用家蚕生产具有特异性或经济价值高的蛋白质,已成为研究的一个热点。家蚕大规模EST测序和基因组框架图的相继完成,不仅对蚕业科学研究和产业发展有着重大意义,而且对于整个生命科学的研究也具有重要的促进作用,目前的主要工作是对家蚕基因组中的大量基因进行研究,以探索其具体的生物学功能。CyclinB3和CyclinB两种周期蛋白是G2期向M期转化的重要调节因子,家蚕丝腺组织内的丝腺细胞只进行核内有丝分裂,细胞周期只进行G1期向S期的转换。本论文主要由进行了家蚕细胞周期蛋白CyclinB3基因的克隆和家蚕细胞周期蛋白CyclinB3与CyclinB基因的功能研究。获得的研究结果如下:(1)家蚕细胞周期蛋白CyclinB3基因的克隆及序列分析利用家蚕EST数据,根据拼接结果设计引物,体外克隆该基因的编码区序列,包含ORF全长的CyclinB3基因。该基因全长1665bp,ORF长1536bp,由6个内含子和7个外显子构成,编码511个氨基酸,预测分子量57.8kDa,等电点为9.18。CyclinB3基因含有一个蛋白破坏框,并且位于第75个aa到第84个aa之间。用在线SMART程序进行结构域分析,表明CyclinB3基因在第288个aa到第379个aa之间和第392个aa到第473个aa之间各含有两个保守结构域,又称周期蛋白框。通过NCBI的Blast程序进行在线蛋白质序列比对分析表明,家蚕CyclinB3的碳末端保守结构域与果蝇的保守结构域蛋白相似。(2)家蚕细胞周期蛋白CyclinB3和CyclinB基因的功能研究利用细胞的RNAi技术,通过脂质体介导dsRNA,转染BmN-SWU1,流式细胞仪分析结果显示:dsRNA—CyclinB3、dsRNA—CyclinB和dsRNA—CyclinB3/B分别转染卵巢细胞48h后,细胞中G2/M期细胞百分数分别为63.65%、65.43%和69.56%。实验结果表明细胞干涉后,dsRNA转染能下调CyclinB3和CyclinB基因表达,导致细胞周期阻滞于G2/M期。MTT实验结果显示:dsRNA—CyclinB3/B、dsRNA—CyclinB和dsRNA—CyclinB3分别转染细胞48h后,对卵巢细胞的生长抑制率分别为51.79±2A0%、45.22±2.02%和38.33±1.47%,均有显著性差异(P＜0.01)。实验结果表明细胞干涉后,dsRNA转染能下调CyclinB3和CyclinB基因表达,抑制家蚕卵巢细胞的增殖。