目的：制备兔抗人SIRT1多克隆抗体；建立稳定表达和稳定RNA干扰SIRT1的HepG2细胞株，探讨SIRT1对HepG2生长、凋亡以及胰岛素受体底物2（insulin receptor substrate，IRS-2）mRNA表达的影响。 方法：根据GeneBank中SIRT1的cDNA序列设计一对带有BamHⅠ和NotⅠ酶切位点的引物，以含SIRT1全长cDNA序列的pBabe-SIRT1质粒为模板，PCR扩增SIRT1编码区一个基因片段，用BamHⅠ和NotⅠ对纯化回收的PCR产物、pGEX-4T-1载体分别双酶切并纯化回收后进行连接反应；将构建的pGEX-4T-1-SIRT1重组体转化大肠杆菌BL21（DE3），用IPTG诱导转化菌表达融合蛋白GST-SIRT1，并优化表达条件，亲和层析纯化回收的GST-SIRT1通过考马斯亮蓝法测定其浓度；融合蛋白免疫两只家兔，按常规进行基础免疫和加强免疫后采血，分离获得多克隆抗体的抗血清，分别用ELISA法和Western blot法鉴定抗血清的效价和特异性；在阳离子聚合物的介导下将pBabe-SIRT1、pBabe、pSUPER-SIRT1RNAi和pSUPER四种逆转录病毒载体分别转染HepG2，嘌呤霉素抗性筛选，RT-PCR法和Western blot法检测SIRT1的表达水平；流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期；RT-PCR法分析IRS-2 mRNA的表达。 结果：双酶切法和测序鉴定结果显示成功构建了原核表达重组载体pGEX-4T-1-SIRT1，转化BL21（DE3）后获得高效表达GST-SIRT1融合蛋白的菌种；优化了原核表达条件：IPTG诱导浓度为0.8mmol/L，诱导时间为4h，诱导温度为30℃，蛋白质分离纯化后浓度达到2.427mg/mL，共5mL； ELISA法测定获得的多克隆抗体的效价达到1：6400，Western blot检测抗血清的特异性较好；RT-PCR和Westernblot分析表明成功建立了稳定表达SIRT1和稳定干扰SIRT1的HepG2细胞株；流式细胞术结果表明，SIRT1过表达和RNA干扰后均能抑制HepG2细胞凋亡，较转染空载体和未转染的HepG2细胞，差异具有显著性统计学意义（P<0.01），SIRT1过表达可使细胞周期产生S期和G2期停滞现象，而SIRT1干扰后对细胞周期影响不明显；RT-PCR分析表明SIRT1过表达可使IRS-2 mRNA表达明显增加，SIRT1经RNA干扰表达下降后可使IRS-2 mRNA表达明显减少，较转染pBabe和未转染组细胞，差异均具有显著性统计学意义（P<0.01）。 结论：制备了兔抗人SIRT1多克隆抗体；成功建立了稳定表达SIRT1和稳定干扰SIRT1的HepG2细胞株；SIRT1过表达和干扰均可抑制HepG2细胞凋亡，SIRT1过表达可使细胞周期产生停滞现象，而SIRT1干扰对细胞周期影响不明显；SIRT1表达水平与HepG2细胞中IRS-2 mRNA的表达水平呈正相关。