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目的：肝癌是人类健康的主要杀手。虽然这些年对肝癌的研究取得了很大的进展，治疗方法也在逐步的改善，但是患者术后生存的问题依旧很严峻。肝癌的转移是造成肝癌患者术后生存时间短的重要因素，而淋巴道转移又是肝癌转移的重要方式之一，因此了解肝癌淋巴道转移的机制和影响因素、与转移相关的基因位点，可以为临床上肝癌的治疗和延长患者的生存率提供有利的支持和帮助。Hca-F细胞和Hca-P细胞是一对来自于同一亲本、高度同源、遗传背景相似，但却具有不同淋巴道转移潜能的小鼠肝癌腹水型细胞株。其中Hca-F细胞是具有高淋巴道转移潜能的细胞株，其淋巴结的转移率>70%；而Hca-P细胞则是具有低淋巴道转移潜能的细胞株，其淋巴结的转移率<30%。本实验室在前期的研究中应用了抑制性消减杂交技术、基因芯片技术以及定量蛋白质组学技术等，在Hca-F细胞和Hca-P细胞中，找到差异性表达的基因，如膜联蛋白A7（Anxa7）、c-Jun氨基末端激酶（Jnk）、凝溶胶蛋白（Gsn）等，这些基因在Hca-F细胞中均呈现出高表达，提示可能与肝癌淋巴道的转移相关。Anxa7是钙依赖的膜联蛋白家族的成员之一，它能够促进膜的结合，聚集和融合，抑制细胞中磷脂酶A的活性、能够参与细胞的磷脂化和细胞骨架的活动、抗凝，调节膜受体的功能、促进细胞的分泌、并在细胞的信号转导过程中起着非常重要的作用。Jnk是丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）超家族的成员之一，是一个非常重要的信号传导的通路。它能够参与细胞的分化，凋亡等一系列的生理过程。Gsn是凝溶胶蛋白超家族中的成员之一，是种很重要的肌动蛋白结合蛋白。它能够以钙依赖的方式控制肌动蛋白的结构，重组肌动蛋白，并能够参与细胞的运动以及细胞的程序性死亡。同时Gsn也可以作为转录的辅助激活蛋白，同时能促进雄激素受体的转录活性。方法：本实验采用亚细胞蛋白质组学的方法，将Hca-F细胞、Hca-P细胞、稳定转染PG-CMV-EGFP-Kan/neo-Annexin A7表达载体的Hca-F(FAnxa7上调细胞)细胞株和稳定转染pSilencer3.1-shRNA表达载体的Hca-P(PAnxa7下调细胞)细胞株进行亚细胞组分的提取，并用Western Blotting的方法对各个亚细胞组分中Anxa7、Jnk、Gsn基因进行定位和比较，进一步明确这些差异性基因表达的部位和功能，为以后的研究打下坚实的基础。结果：在FAnxa7上调细胞和PAnxa7下调细胞的细胞浆、细胞膜以及细胞骨架中均检测到了Anxa7的表达。Anxa7在FAnxa7上调细胞的细胞浆、细胞膜以及细胞骨架中的表达均高于Hca-F细胞（P <0.05），而在PAnxa7下调细胞的细胞浆、细胞膜以及细胞骨架中的表达均低于Hca-P细胞（P <0.05）。提示FAnxa7上调细胞和PAnxa7下调细胞转染成功。在FAnxa7上调细胞和PAnxa7下调细胞的细胞核和细胞骨架中均检测到了Jnk的表达。在FAnxa7上调细胞的细胞浆、细胞膜以及细胞骨架中检测到了Gsn的表达，而在PAnxa7下调细胞中，只在细胞浆以及细胞骨架上检测到了Gsn的表达。结论：1.在FAnxa7上调细胞和PAnxa7下调细胞中，Anxa7主要定位在细胞浆，细胞膜以及细胞骨架上。Jnk主要定位在细胞核和细胞骨架上。在FAnxa7上调细胞中Gelsolin主要定位在细胞浆，细胞膜以及细胞骨架上，而在PAnxa7下调细胞中，Gsn主要定位在细胞浆以及细胞骨架上。2. Anxa7在FAnxa7上调细胞的细胞浆、细胞膜以及细胞骨架中的表达均高于Hca-F（P <0.05），而在PAnxa7下调细胞的细胞浆、细胞膜以及细胞骨架中的表达均低于Hca-P（P <0.05）。