BnCYP704B1基因是甘蓝型油菜隐性核不育两系型S45AB的育性恢复基因。研究表明,该基因显著表达于花药发育四分体时期绒毡层结构,编码中长链脂肪酸羟化酶,参与绒毡层形成和PCD过程中的脂类代谢。该基因表达具有显著的时空特异性。本研究旨在利用启动子表达分析和酵母单杂交技术寻找该基因上游的转录调控因子,丰富和完善油菜花药发育基因调控网络。主要研究结果如下:1油菜BnCYP704B1核心启动子的发现扩增油菜BnCYP704B1起始密码子上游1085bp为启动子区段。并根据生物信息学预测对该区段以616、466、340、203、101和80bp长度进行5’端截短,分别命名Pms1616、Pms1466、Pms1340、Pms1203、Pms1101、Pms180,对重组载体和空载对照Pck以农杆菌介导的遗传转化转入野生型拟南芥,对获得的阳性转基因植株花蕾进行GUS组织化学染色。染色结果显示:Pms1616、Pms1466、Pms1340、Pms1203缺失载体花蕾中存在GUS基因的蓝色信号。Pms1101、Pms180缺失载体和空载对照Pck花蕾中均无GUS信号。以此推测,在起始密码子上游-203bp~-101bp区段存在驱动BnCYP704B1在花药中表达的顺式作用元件。2油菜BnCYP704B1调控基因的挖掘用上述顺式作用元件构建酵母单杂交诱饵载体Pro45-AbAi,通过诱饵菌株自激活浓度测定,确定AbA浓度为100ng/mL时可有效抑制菌株的自激活该效应。以该浓度筛选油菜花蕾cDNA文库,筛得到三个完整的MYB类转录因子。在油菜中克隆上述基因,DNA-蛋白质点对点实验证明得这些基因与P45-AbAi相互作用。3调控基因的遗传学验证在拟南芥数据库中同源比对得这三个转录因子的同源基因为at4g17695(KAN3)、at3g12730、at4g13640(PHR3)。挑选这些基因的T-DNA插入突变体和激活标签突变体。根据载体序列设计特异性引物PCR鉴定突变株的纯合性。对纯合植株育性进行观察,发现无不育现象。