细胞因子治疗是目前临床应用最多、疗效最肯定的生物治疗，IL-2、INF、CSF等在临床上得到了广泛的应用，并取得了一定的效果，但是，由于存在以下缺点而使临床疗效不满意。①细胞因子在体内的生物半衰期较短，一般认为静脉注射为5～7分钟，24小时内消失殆尽。因此，要保证有效浓度必须持续大剂量静脉给药或间断皮下注射。大剂量静脉给药可引起严重的副作用，如血管渗漏综合征，直立性低血压及严重潜在不适，况且，细胞因子疗法的特点是长期低剂量给药效果好，然而长期反复皮下注射，病人难以坚持，因此，临床上不易达满意效果。②基因工程细胞因子(重组细胞因子)的纯度和活性尚不够满意。目前应用的重组细胞因子均为原核细胞产生，细菌蛋白和脂多糖和纯化过程中的有机溶剂很难被彻底清除，因此临床应用容易产生发热等流感样症状，其它隐性危害尚不清楚。同样，细胞因子的活性也因生产、贮存和运输等方面的影响而不易保证。 基因治疗是通过人工方法改变靶细胞的基因结构从而获得疗效，主要策略分为基因转移和基因灭活两大类。基因转移是目前最主要的方法，即是将外源性目的基因(包括细胞因子、MHC分子、共刺激分子、抗癌基因、反义核酸、抗肿瘤药物相关基因及病毒基因等)导入病变细胞或其它细胞，目的基因的表达产物改变缺陷细胞的功能或使原有的功能得到加强，包括免疫基因治疗、靶向化疗或提高机体化疗耐受性以及增强抗癌基因的表达等方案。操作过程包括基因克隆、构建质粒、转染、细胞培养利细胞移植等复杂操作。(1)自体细胞作为载体：细胞移植后不会产生免疫排斥反应，但需对每一位病人进行以上操作，不仅工作量巨大、费用较高，而且质量难以保证。因此，不易在临床上广泛应用。(2)异体／种细胞作为载体：因免疫排斥而难以进行移植。(3)基因直接注射：有可能整合到宿主基因组，存在不安全隐患。 微囊化基因工程细胞可以克服上述的不足，基因工程细胞是指利用各种基因转移方法将外源目的基因导入靶细胞，使靶细胞表达并分泌相应的蛋白活性物质。基因工程的优点在于可按照自己的目的和意愿，在体外人工将DNA分子“剪切”并重新“拼接”，形成一个新的杂合的DNA分子，然后将其导入原核或真核细胞内，使该基因在细胞中表达，产生所需 浙江大学博士学位论文要的基因产物。然后将基因工程细胞进行微囊化，把微囊化基因＿卜程细胞作为功能细胞进行体外实验研究和体内治疗、免疫隔离等研究利应川。 微囊的主要特点是：具有半通透性，允许小分于营养物质、水和氧等白由出入，以保证微囊内细胞的正常需要，同时允许目的生物活性物质分泌出微囊外，以发挥其功能；但抗体。淋巴细胞等不能进入，从而保护微囊化细胞免受机体抡疫系统的攻击【’－‘］。微囊化技术克服了兔疫排斥反应，因而使异体／种移植成为可能，使用永生化细胞系统为基冈卜程细胞，所表达的蛋白产物对所有同种疾病病人均能产生治疗作用，由丁细胞包裹在微囊内，可以在体内氏期分泌目的产物。这种表达异源蛋白的优势还在丁：（l）无需对基冈产物进行化学提纯，避免提纯试剂对人体的潜在危害，并且人人降低了L作量和成本；（2）无需改变宿主的基冈组，具有女全性；（3）可批量生产，冻存后随时移植给所需病人，可起到细胞“银行”的作用，避免了自身体细胞基因治疗时每个病人都需要取囱身细胞，并进行培养、基口修饰、筛选等一系列烦琐的操作，这样既保证质量控制，又可人人降低费川；（4）按照治疗需要，控制功能蛋肉的持续性和阶段性表达【’、‘］。微囊化技术在治疗机能赊码和特殊窜要细胞功能丧失性疾病等方面研究和应用较多I卜’人 微囊化基因工程细胞技术是微囊技术与基冈卜程技术的有机结合。具体操作过出为： （1）带有目的基因（外源基因）的＊＊A片段的获得：（2）＊＊A片段与载体＊＊A的壮按 （体外重组）；（3）连接产物导入宿主细胞（受体细胞）：（4）重组体的扩增、筛选与鉴定； （5）目的基因在细胞中的表达；（6）表达产物的分离与鉴定；（）基冈1－程细胞的微囊化； （8）微囊化细胞的体外培养，观察细胞的生K状况利目的基因的蛋白产物的微囊外分泌悄况；（9）建立动物模型，体内移植微囊化细胞，观察治疗效果；（IO）临床应川卜’‘”］。 Maspin是1994年iou等通过上常乳腺上皮与乳腺癌进行减数杂交利芹异显示技术得刮的一种新基冈，研究显示Maspin是一肿瘤抑制基冈，在肿瘤细胞的运动、侵袭、转移及新生血管形成等方面起着重要作川＊－22］ 白细胞介素－12（I－12）在介导机体兔疫反应中起着关键性作川，在体山有抗血管形成作用，有抑制肿瘤细胞生K、运动和侵袭作川l”’＼ IL门还与某些化疗钓物产生协同作川【’飞重组IL刁 已进入临床试验阶段，但全乌应川发现有严重的毒副作川，如胄肠道山血、肝毒性和贫血，其中有引起死亡的报道【’‘］。比．12的基冈治疗同样显示出强人的抗肿瘤铆p，但需将IL－12基冈转染白体的肿瘤细胞或成纤维细胞，要对每一病?