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血管瘤内皮细胞的培养及其生化、细胞学特性分析 背景:血管瘤是一种小儿常见的良性肿瘤,属先天性疾患,为毛细血管扩张增生、血管内皮细胞增生及血管畸形所致。血管瘤虽然是良性瘤,呈浸润性,且继续不断生长,范围较广,故它影响人体的解剖结构和生理功能,造成畸形及容貌缺陷,而对正常组织往往破坏性较大,有的甚至会威胁生命。但由于对其组织发生、分化及生物学行为的研究甚少,对其发病机制仍不完全清楚,目前尚无有效治疗措施。 通过对血管瘤内皮细胞的培养及生化生物学分析,对血管瘤的发生、形成条件、消退机制等会有更进一步的认识,从而为治疗提供合理方案、发现更好的治疗药物、改善血管瘤临床治疗的现状;同时血管瘤为研究血管内皮细胞增殖和血管发生的信号机制提供了宝贵的实验模型,可为研究血管发育提供有益的线索。 目的:本课题旨在掌握血管瘤内皮细胞的生长规律,研究血管瘤及其内皮细胞与正常成人血管及其内皮细胞在组织结构、生化及生物学特征、培养方法、生长曲线等方面有何异同,其中包括第Ⅷ凝血因子相关抗原和P53蛋白的存在和表达情况,为血管瘤的临床治疗提供理论依据。 方法:本课题用常规组织切片技术和染色方法制作血管瘤、正常成人血管及脐静脉的石蜡组织切片;用间接免疫荧光法和激光扫描共聚焦显微镜观察第Ⅷ凝血因子相关抗原在其内的表达情况;用免疫组化法和共聚焦显微镜观察分析血管瘤细胞中荧光标记的P53蛋白的表达情况、对比不同标本的差异。以新鲜血管瘤为材料,用0.1%的胰酶消化血管瘤内皮细胞,用添加了成纤维细胞生长因子（FGF）的含10%小牛血清的M199培养液在含5%CO2、37C°、饱和湿度的培养箱中培养,每隔两天换液,待长成单层细胞以后传代,建立血管瘤内皮细胞系,观察其生长、增殖特征。通过以上试验对血管瘤内皮细胞的生化及生物学特征进行分析。 结果:将皮肤血管瘤组织制成石蜡组织切片后进行常规HE染色,观察发现细胞核呈蓝色,胞浆为淡红色,管腔内红细胞呈橘红色。组织局部核密集,说明细胞以该位置作为生发点,不断增生,向内侵袭,形成新的血管腔,小血管明显增生。 血管瘤组织切片第Ⅷ凝血因子相关抗原免疫组化结果显示,血管瘤周围