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目的:胃癌是临床常见的恶性肿瘤,采用手术、放疗、化疗等传统治疗手段预后仍较差。近年来,树突状细胞(DC)因其强大的抗原提呈及免疫激发能力引起人们广泛重视。胃癌细胞缺乏特异性肿瘤抗原且抗原性弱,以往的研究手段如癌细胞冻融、超声粉碎、癌细胞表面抗原酸洗脱等方法所能获取的肿瘤抗原量及刺激DC激发后续抗肿瘤免疫应答的能力均较弱。为实现肿瘤抗原对DC的更有效刺激,提高DC抗原提呈及免疫激发能力,实现更有效的肿瘤生物治疗效应,由于自体瘤苗的制备时采集自身DC通常会受到采集患者细胞的困难,而异体DC可以从储备的健康志愿者外周血单核细胞中获得,可避免使患者在接受免疫治疗前采集自身外周血的缺陷。本实验将从健康人外周血富集白细胞层中获得的单个核细胞( PBMC)所诱导培养的DC与胃癌SGC7901细胞相融合,观察细胞瘤苗刺激自体和异体T淋巴细胞的增殖性及对SGC7901胃癌细胞的杀伤性,希望能为胃癌DC瘤苗免疫治疗提供新的思路和理论基础,同时也是对无偿捐献血液的一个合理利用,开辟了宝贵的血液资源的有效利用途径。方法:第一部分:人外周血富集白细胞层来源的树突状细胞的培养与鉴定。从健康人的外周血富集白细胞层中获取贴壁细胞,利用GM-CSF、IL-4、TNF-α体外定向诱导分化,获取成熟DC,并对其形态及表面标志进行鉴定。第二部分:胃癌SGC7901细胞-树突状细胞融合疫苗的制备。对应用健康志愿者的外周血白膜层分离制备DC,再与SGC7901胃癌细胞融合制备DC融合性细胞瘤苗,使用HAT/HT选择培养系统筛选培养,获得纯净的融合细胞。第三部分:异体T淋巴细胞经DC融合性细胞瘤苗刺激后的增殖性及对SGC7901胃癌细胞杀伤效应的研究。MTT比色法检测DC融合性细胞瘤苗激活同种同体和同种异体T淋巴细胞的增殖能力及体外杀伤胃癌SGC7901细胞的细胞毒作用。结果:1、健康人外周血(200ml)富集白细胞层所分离、诱导成熟的DC,每份可以获得(3.87±0.31)×107个成熟的DC,其表面分子表达水平可达CD83(48.54±2.12)%,CD1a(50.59±5.06)%,CD86(63.04±4.42)%,HLA-DR(89.12±3.99)%。2、DC融合性细胞瘤苗具有类似于DC的悬浮生长特性,未保留亲代SGC7901胃癌细胞的贴壁生长特性。DC和SGC7901胃癌细胞融合后经光镜观察,可见大量体积明显增大的融合细胞悬浮生长于培养基中,胞浆透明,细胞边界清晰,胞膜完整,部分融合细胞体积巨大。经HAT选择培养基筛选培养2周、HT选择培养基筛选培养1周后光镜观察,可见细胞数量明显减少,仅剩少量体积较大、胞膜完整、呈均匀圆形悬浮生长的融合细胞存在,细胞表面未见明显的毛刺样突起,细胞内有单个存在的较亲代细胞明显增大的细胞核。3、DC融合性细胞瘤苗对自体和异体T淋巴细胞的增殖能力,随融合细胞与淋巴细胞的比例增加而增殖能力逐渐增加,在相同效靶比情况下,两种T淋巴细胞的增殖效应没有显著差异。DC融合性细胞瘤苗体外激活的自体和异体T淋巴细胞对SGC7901胃癌细胞的杀伤率没有显著差异。体外细胞毒实验中,DC融合性细胞瘤苗激活的两种T淋巴细胞对SGC7901胃癌细胞的杀伤率均比未激活的T淋巴细胞明显增高,其两者间没有明显差异。结论:1、健康人外周血富集白细胞层所分离出的单个核细胞,经GM-CSF、IL-4和TNF-α细胞因子诱导培养,可获得具备典型特征及细胞表型的DC。2、胃癌细胞SGC7901细胞与DC经PEG诱导融合,HAT/HT选择培养,可获得纯净融合细胞。3、融合细胞具有类似于DC的悬浮生长特性,而不保留亲代SGC7901胃癌细胞的贴壁生长特性,细胞数量较亲代细胞明显减少。4、DC融合性细胞瘤苗对自体和异体T淋巴细胞的增殖能力没有显著差异,但淋巴细胞被DC融合性细胞瘤苗激活后对SGC7901胃癌细胞的杀伤率可明显增高。