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目的:肺癌是世界上发病率及死亡率最高的恶性肿瘤之一,侵袭转移是引起肺癌死亡的主要原因;TGF-β是经典的肿瘤细胞EMT发生的诱导剂;TP63α与多种肿瘤的转移密切相关;莱菔硫烷是一种在肿瘤发生的多个阶段发挥抑癌作用而对多种肿瘤具有良好化学预防作用的天然植物化学物。建立TGF-β诱导肺癌细胞模型,通过莱菔硫烷处理TGF-β诱导的肺癌细胞,观察莱菔硫烷对肺癌EMT/侵袭转移的干预作用;转染TP63α联合莱菔硫烷处理TGF-β诱导的肺癌细胞,探索TP63α对于莱菔硫烷抑制TGF-β诱导肺癌的调控作用。方法:1、用不同浓度的莱菔硫烷(SFN)处理肺癌细胞A549和H1299,利用MTT法测定细胞活力;同时选取无细胞毒作用浓度处理经TGF-β诱导的肺癌细胞A549和H1299,观察细胞形态学变化;利用细胞划痕实验以及Transwell小室观察经莱菔硫烷处理后,肺癌细胞A549和H1299的侵袭以及转移能力的改变;利用Western blotting实验观察肺癌细胞A549和H1299上皮标志物E-cadherin、ZO-1,间质标志物N-cadherin、Vimentin以及TAp63、ANp63α的蛋白水平的改变。2、用ANp63α质粒及莱菔硫烷联合处理TGF-β诱导的肺癌细胞A549和H1299,观察细胞形态学改变;利用细胞划痕实验以及Transwell小室观察△Np63α质粒与莱菔硫烷联合处理TGF-β诱导的肺癌细胞A549和H1299的侵袭以及转移能力的改变;利用Western blotting实验观察△Np63α质粒与莱菔硫烷联合处理经TGF-β诱导的肺癌细胞A549和H1299的EMT相关蛋白分子的变化。3、用TAp63α-siRNA及莱菔硫烷联合处理TGF-β诱导的肺癌细胞A549和H1299,观察细胞形态学改变;利用细胞划痕实验以及Transwell小室观察TAp63α-siRNA与莱菔硫烷联合处理TGF-β诱导的肺癌细胞A549和H1299的侵袭以及转移能力的改变;利用Western blotting实验观察TAp63α-siRNA与莱菔硫烷联合处理经TGF-β诱导的肺癌细胞A549和H1299的EMT相关蛋白分子的变化。结果:1、TGF-β对肺癌细胞EMT/侵袭转移的影响10ng/mlTGF-β的诱导下,A549细胞和H1299细胞均由上皮样椭圆形变为间质样长梭形,细胞的侵袭转移能力明显提高。2、TGF-β对肺癌细胞中TP63α基因表达的影响10ng/mlTGF-β的诱导下,A△Np63α蛋白水平上升,TAp63α蛋白水平下降。3、莱菔硫烷对A549和H1299细胞活力的影响MTT结果显示,莱菔硫烷浓度低于3.5μmol/L时对A549细胞没有明显毒性;低于4μmol/L时对H1299细胞没有明显毒性。因此,在此基础上,莱菔硫烷选择1μmol/L、2μmol/L的浓度开展后续实验。4、莱菔硫烷对TGF-β诱导肺癌细胞EMT/侵袭转移的干预作用莱菔硫烷处理A549细胞和H1299细胞3天后,细胞均由间质细胞形态向上皮细胞形态转变,且侵袭转移能力明显降低。Western blotting实验结果显示,莱菔硫烷干预后,细胞上皮标志物E-cadherin、ZO-1的蛋白水平明显上升,而细胞间质标志物N-cadherin、Vimentin的蛋白水平明显下降。5、莱菔硫烷对TGF-β诱导的肺癌细胞中TP63α基因表达的影响莱菔硫烷处理A549细胞和H1299细胞3天后,△Np63α蛋白水平下降,TAp63α蛋白水平上升。6、TP63α转染对肺癌细胞EMT/侵袭转移的影响转染ANp63α质粒或TAp63α-siRNA,使ANp63α高表达或TAp63α低表达之后,细胞由上皮样椭圆形变为间质样长梭形;通过细胞划痕实验和Transwell小室实验显示ANp63α高表达或TAp63α低表达使A549细胞和H1299细胞侵袭转移的能力明显上升。△Np63α高表达或TAp63α低表达使细胞上皮标志物E-cadherin、ZO-1的蛋白水平明显下降,而细胞间质标志物N-cadherin、Vimentin的蛋白水平明显上升。7、△Np63α在莱菔硫烷干预TGF-β诱导肺癌细胞EMT/侵袭转移中的作用转染△Np63α质粒,使其高表达之后,再联合莱菔硫烷处理经TGF-β诱导的A549细胞和H1299细胞3天,显微镜下观察细胞形态发现,ANp63α高表达逆转莱菔硫烷引起的肺癌细胞由间质样长梭形变为上皮椭圆形;通过细胞划痕实验和Transwell小室实验观察发现,ANp63α高表达逆转莱菔硫烷干预引起的A549细胞和H1299细胞侵袭转移的能力下降。Western blotting实验结果显示,ANp63α高表达逆转莱菔硫烷引起的细胞上皮标志物E-cadherin、ZO-1蛋白水平的上升以及细胞间质标志物N-cadherin、Vimentin蛋白水平的下降。8、TAp63a在莱菔硫烷干预TGF-β诱导肺癌细胞EMT/侵袭转移中的作用转染TAp63α-siRNA,使其低表达之后,再联合莱菔硫烷处理经TGF-β诱导的A549细胞和H1299细胞3天,显微镜下观察细胞形态发现,TAp63α低表达逆转莱菔硫烷引起的肺癌细胞由间质样长梭形变为上皮椭圆形;通过细胞划痕实验和Transwell小室实验观察发现,TAp63α低表达逆转莱菔硫烷干预引起的A549细胞和H1299细胞侵袭转移的能力下降。Western blotting实验结果显示,TAp63α低表达逆转莱菔硫烷引起的细胞上皮标志物E-cadherin、ZO-1蛋白水平的上升以及细胞间质标志物N-cadherin、Vimentin蛋白水平的下降。结论:莱菔硫烷通过调节TP63α的表达抑制TGF-β诱导肺癌细胞EMT。