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目的:构建HER2-sc Fv表达载体,体外纯化获得HER2-sc Fv蛋白,进而探讨HER2-sc Fv抑制高表达HER2的肿瘤细胞系T6-17增殖,为下一步抗肿瘤研究奠定实验基础。方法:①根据已有质粒p UC57-HER2-sc Fv为模板设计引物,采用PCR技术获取目的基因HER2-sc Fv。②运用双酶切及分子克隆等技术将目的基因片段克隆入原核表达质粒p ET28a,构建p ET28a-HER2-sc Fv重组质粒。③重组质粒p ET28a-HER2-sc Fv转化Rosetta大肠杆菌,利用IPTG诱导表达获得HER2-sc Fv蛋白。④蛋白亲和层析方法纯化蛋白,进而对包涵体蛋白复性。⑤SDS-PAGE及Western blot证实IPTG诱导HER2-sc Fv蛋白表达。⑥实验分为三组,分别为空白对照组,HER2-sc Fv组和曲妥珠单抗组。应用MTT法研究HER2-sc Fv对HER2阳性肿瘤细胞T6-17增殖的生长抑制作用。结果:①PCR技术成功获得HER2-sc Fv目的基因。②构建的原核表达质粒载体p ET28a-HER2-sc Fv,经鉴定证实插入序列方向大小正确,质粒构建成功。SDS-PAGE和Western blot证实IPTG诱导p ET28a-HER2-sc Fv转化的Rosetta大肠杆菌表达HER2-sc Fv蛋白成功,大小约为29KDa。获得包涵体蛋白并复性,浓度为1358.3mg/L,纯度约为90%,一升菌液可获得蛋白约10mg左右。③MTT实验检测三组结果显示:HER2-sc Fv组抑制HER2阳性肿瘤细胞T6-17的抑制率为33.52%,与PBS组比较差异有统计学意义(P=0.000,P<0.05);曲妥珠单抗组抑制HER2阳性肿瘤细胞T6-17的抑制率为34.79%,与PBS组比较差异有统计学意义(P=0.000,P<0.01);而HER2-sc Fv组与曲妥珠单抗组比较差异无统计学意义(P=0.429,P>0.05)。结论:①成功构建重组质粒pET28a-HER2-sc Fv。②重组质粒转化Rosetta大肠杆菌后经IPTG诱导可高效稳定的表达HER2-sc Fv蛋白。③HER2-sc Fv蛋白在体外可以显著抑制HER2阳性肿瘤细胞T6-17的增殖,该蛋白可进一步应用于体内实验研究。