一个人类α甘露糖苷酶全长cDNA的克隆、序列分析与编码蛋白质性质初探

来源 :中国协和医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wdj702
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机体的蛋白质大多以糖复合物的形式存在,而糖蛋白中的聚糖不但与蛋白质的生物学功能密切相关,而且本身也有着重要的生物学意义,因此成为继蛋白质和核酸之后又一生命科学的重要研究领域。尽管因为聚糖结构十分复杂,使其结构和功能的研究困难重重,但近年来,随着分子生物学知识和技术的渗入,极大地促进了糖蛋白聚糖结构和功能的研究。 α-甘露糖苷酶作为一种重要的糖加工酶,参与N-聚糖的加工成熟。为了研究其在聚糖生物合成中的作用,学者们已先后从酵母和多种哺乳动物细胞中克隆出了十多个不同的α-甘露糖苷酶的基因。本实验室也于数年前用抗人活化B淋巴细胞株3D5细胞的单克隆抗体6A8,自一个人扁桃体细胞λgt11 cDNA文库中筛选到了一个长1358bp的cDNA克隆,内含一个编码425个氨基酸的开放阅读框架。从此框架核苷酸序列推断的氨基酸序列与一个大鼠内质网α-甘露糖苷酶氨基酸序列的后二分之一高度同源。在1995年我们已向GenBank登记了这个cDNA序列,称之为6A8 cDNA。但是它的ORF起始密码子前没有终止密码子。为了确定其是否为全长cDNA,我们进行了人多种组织中6A8 mRNANorthern blot检测。结果表明6A8有两个转录本形式,一为±4.3kb,另一为±3.5kb。这表明1358bp cDNA非为全长cDNA。 以1358 bp cDNA作探针,从一个新购买的人扁桃体细胞λgt11 cDNA文库(ATCC No.37546)作Southern blot,筛选到了两个阳性克隆,克隆1和克隆2,长度分别为±2.1kb和±1.6kb,克隆1与1358 bp cDNA的5′端有594bp的重叠,
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