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背景：肠易激综合征(IBS)是世界范围内患病率较高的一种功能性肠病,其病因及发病机制极其复杂,随着社会压力及竞争剧增,各种急慢性应激刺激等心理因素在IBS的发病中的作用日益得到重视。随着对体内脑肠肽及胃肠道激素等生物活性物质的研究深入,研究者发现IBS患者体内的生物活性物质水平发生改变,如降钙素基因相关肽(CGRP)、胆囊收缩素(CCK)、胃动素(MTL),褪黑素(MT)、P物质(SP)等,这些生物活性物质与餐前及餐后胃肠道运动密切相关,并参与胃肠道分泌、吸收、感觉等生理功能,IBS患者体内生物活性物质的异常与该病的发生发展是否有关值得深入研究。胃肠动力紊乱与IBS的发病直接相关,研究表明结肠的收缩频率、幅度及峰电位发生频率,特别是在餐后或受外界及心理波动等刺激后,IBS患者胃肠动力变化(增强或减弱)幅度与健康人比较显著增强。因此本研究主要探讨脑肠肽及胃肠道激素水平在急慢性应激中的变化及其对结肠动力的影响并探求其具体作用机制。第一部分目的：观察慢性避水应激模型的基础排便及造模期间排便的变化,比较在急性应激环境下排便的变化,观察避水应激模型大鼠血浆内典型胃肠激素及脑肠肽水平变化,并探讨其可能存在的机制。方法：将20只大鼠按照随机数字表分为慢性避水应激组及假避水应激组。观察慢性避水应激模型排便异常、基础排便及对于急性应激反应下排便的影响,采用ELISA法测定血浆内典型胃肠激素及脑肠肽水平。结果：慢性避水应激显著增加大鼠大便颗粒数(5.36±1.00Vs.2.44±0.64,n=10,p<0.01),慢性避水应激组大鼠前后五天大便颗粒数显示明显差异(6.14目的：探讨避水应激对大鼠近端结肠平滑肌肌条收缩幅度及频率的影响,探讨避水应激组大鼠血浆对于大鼠近端结肠平滑肌肌条收缩幅度及频率的影响,并探讨其可能存在的机制。方法：取离回盲部约3cm的大鼠近端结肠,置于持续充入95%O2和5%CO2混合气体的无钙PSS中,剥离黏膜及黏膜下后制成3mm×8mm纵、环型平滑肌肌条。将肌条置于持续低流量95%02和5%CO2混合气体的37℃台式液中,与张±0.69vs.4.58±0.50,n=10,p<0.05),然假避水应激组大鼠前后五天大便颗粒数无明显变化(2.46±0.67vs.2.42±0.69,n=10,p>0.05)；避水应激组大鼠与假避水应激组大鼠基础大便颗粒数无明显统计学差异(3.10±1.00vs.2.50±0.85,n=10,p>0.05)；在急性应激下,两组大鼠大便颗粒数较基础状态均有显著增高,然避水应激组大鼠大便颗粒数显著高于假避水应激组大鼠大便颗粒数(9.50±1.72vs.7.80±1.69,n=10,p<0.05)；避水应激组大鼠血浆中P物质(SP)(92.44±5.76ng/L vs.58.26±7.97ng/L,n=10,p<0.05)、促甲状腺激素释放激素(TRH)(2.12±0.16ulU/ml vs.1.02±0.25ulU/ml, n=10,p<0.01)、胃动素(MTL)(111.69±2.41pg/L vs.66.53±7.49pg/L, n=10, p<0.05)及胆囊收缩素(CCK)(153.05±25.41ng/L vs.75.51±19.23ng/L,n-10, p<0.01)显著高于假避水应激组大鼠；然血管活性肠肽(VIP)、降钙素基因相关肽(CGRP)及促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)于两组大鼠中则无明显差异；神经肽Y则避水应激组大鼠显著低于假避水应激组大鼠(43.67±12.03ng/L Vs.85.48±20.53ng/L,n=10,p<0.01)。结论：在外界急慢性应激下,胃肠道激素及脑肠肽可能通过各个激素相对水平的变化以调节结肠运动方式及幅度,此外,结肠平滑肌上受体表达水平及细胞膜上离子通道开放亦有一定的影响。力换能器相连。给予1.0g的前负荷,每20分钟更换台式液一次,待肌条出现自发节律性收缩并且稳定后采用RM6240型多道生理信号采集系统记录纵、环平滑肌肌条处理前后收缩频率和幅度的变化。结果：避水应激组大鼠近端结肠纵、环行平滑肌肌条收缩幅度明显高于假避水应激组大鼠近端结肠纵、环行平滑肌肌条收缩幅度(1.41±0.20g vs.1.12±0.27g,P<0.01,n=10)、(0.46±0.11g vs.0.35±0.07g,P<0.05,n=10)；两组大鼠的纵、环形平滑肌肌条无显著差异；当向浴槽加入河豚毒素(100nM/L)后,避水应激组大鼠及假避水应激组大鼠近端结肠纵、环行平滑肌肌条收缩幅度均有小幅下降,加入河豚毒素(100nM/L)后,避水应激组大鼠近端结肠纵、环行平滑肌肌条收缩幅度仍然明显高于假避水应激组大鼠近端结肠纵、环行平滑肌肌条收缩幅度(P<0.01,n=10)；其收缩频率亦无显著差异。正常大鼠近端纵行平滑肌于含河豚毒素(100nM/L)稳定收缩30min后,其收缩幅度与假避水应激组大鼠近端结肠纵行平滑肌肌条收缩幅度无显著差异(1.05±0.21g to1.07±0.29g,P>0.05,n=10),往浴槽加入100ul避水应激组大鼠血浆后,其收缩幅度显著下降(1.05±0.21g vs.0.83±0.26g,P<0.05,n=10),然加入100u1假避水应激组大鼠血浆后,其收缩幅度无显著差异(1.05±0.21g vs.1.01±0.30g, P>0.05,n=10)；然两组大鼠血浆对于其收缩频率均无显著影响。正常大鼠近端环行平滑肌于含河豚毒素(100nM/L)(?)急定收缩30min后,其收缩幅度与假避水应激组大鼠近端结肠环行平滑肌肌条收缩幅度亦无显著差异(0.30±0.12g to0.33±0.10g,P>0.05,n=10),当往浴槽加入100ul避水应激组大鼠血浆后,其收缩幅度显著下降(0.30±0.12g to0.23±0.10g, P<0.05,n=10),然加入加入100ul假避水应激组大鼠血浆后,其收缩幅度无显著差异(0.30±0.12g to0.31±0.09g,P>0.05,n=10)。结论：避水应激能够增强大鼠近端结肠纵、环型平滑肌肌条收缩幅度,然其血浆则抑制正常大鼠近端结肠纵、环型平滑肌肌条收缩幅度,故大鼠近端结肠平滑肌肌条收缩幅度可能为结肠平滑肌细胞本身收缩效能的变化及大鼠体内胃肠道激素及脑肠肽相对水平变化的综合效应。目的：探讨慢性避水应激对单个大鼠结肠平滑肌细胞电压依赖钾通道电流和钙依赖钾通道电流的影响；探讨慢性避水应激组大鼠血浆对正常大鼠单个大鼠结肠平滑肌细胞电压依赖钾通道电流和钙依赖钾通道电流的影响,并探讨其可能发生的机制。方法：取离回盲部约3cm的大鼠近端结肠,置于持续充入低流量的95%02和5%CO2混合气体的无钙PSS中,去除黏膜及黏膜下后剪成2mm×2mm的平滑肌肌块。置于新鲜配制的无钙消化液中,37℃振荡温浴18～30min(每3分钟取一管),分别漂洗五次。吹打成细胞悬液,取细胞悬液接种于装有倒置显微镜的灌流槽中,待细胞贴壁后用台式液以2ml/min的速度灌流,选取贴壁良好,折光性好,胞膜光滑清晰的细胞进行高阻封接。用EPC-10膜片钳放大器记录全细胞模式下结肠平滑肌细胞电压依赖钾通道及钙依赖钾通道电流处理前后的变化。结果：在全细胞记录模式下,电压依赖性钾电流可记录到两种模式,即延迟整流型钾电流(Ik)及瞬时外向型钾电流(Ito)。两种电流在实验中记录的比值约为(15：1)。在刺激电压为+60mv下,避水应激组大鼠电压依赖性钾电流显著低于假避水应激组大鼠(8.05±0.86pA、pF vs.12.86±0.91pA/pF,p<0.01n=10),避水应激组大鼠电流电压曲线较避水应激组大鼠显著下移。在刺激电压为+80mv下,避水应激组大鼠电压依赖性钾电流显著低于假避水应激组大鼠(21.49±1.75pA/pF vs.27.20±1.30pA/pF,p<0.01n=10),避水应激组大鼠电流电压曲线较避水应激组大鼠显著下移。加入60ul避水应激组大鼠血浆后,正常大鼠近端结肠平滑肌细胞电压依赖性钾电流显著增高(13.05±0.66pA/pF vs.17.10±1.27pA/pF,p<0.01n=10),而加入60ul假避水应激组大鼠血浆后,正常大鼠近端结肠平滑肌细胞电压依赖性钾电流无明显改变(13.05±0.66pA/pF vs.13.69±0.78pA/pF,p>0.01n=10)；加入避水应激组大鼠血浆后,正常大鼠近端结肠平滑肌细胞钙依赖性钾电流显著增高(27.55±1.33pA/pF vs.32.54±2.02pA/pF,p<0.01n=10),而加入假避水应激组大鼠血浆后,正常大鼠近端结肠平滑肌细胞电压依赖性钾电流无明显改变(27.55±1.33pA/pF vs.28.59±1.49pA/pF,p>0.01n=10)。结论：慢性应激能够抑制大鼠结肠平滑肌细胞膜电压依赖钾通道及钙依赖钾通道电流,而慢性应激组大鼠血浆能够增强大鼠结肠平滑肌细胞膜电压依赖钾通道及钙依赖钾通道电流。故可认为结肠平滑肌细胞的电流水平受细胞膜上离子通道开放水平、细胞膜上激素受体水平及激素水平共同作用的结果。