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金黄色葡萄球菌（简称金葡菌）是一种重要的人兽共患病病原菌，也是临床上最常见的致病菌，可引起包括败血症在内的多种严重感染。金葡菌的高致病性与其毒力因子的表达有直接关系。为开辟新的治疗金葡菌疾病的方法，国内外都将焦点聚集在毒力因子的研究上。酚可溶性调控蛋白（Phenol-soluble Modulin，PSM）是一种新发现的金葡菌胞外分泌蛋白，也是金葡菌又一重要的毒力因子。PSM主要由PSM-α和PSM-β构成。PSM-α由四个基因（PSM-α1、PSM-α2、PSM-α3、PSM-α4）构成，而PSM-β由两个基因（PSM-β1、PSM-β2）组成。在这两种组分中，PSM-α对细胞的裂解能力最强，已被报道是引起小鼠菌血症的主要毒力因子。本研究中，我们通过设计linker将编码PSM-α的四个基因串联，将酶切结果准确的目的片段与表达载体pGEX-4T-1连接，成功构建了表达质粒pGEX-PSM-α，并将其转入大肠杆菌表达菌DE3中。通过改变诱导表达的条件诱导蛋白的表达，经SDS-PAGE及Westernblot鉴定表达的蛋白为可溶性蛋白。可溶性蛋白经Glutathione Sepharose4B亲和层析及凝血酶处理后，获得纯度较高的目的蛋白PSM-α。纯化酶切的目的蛋白经浓缩后通过蛋白浓度检测试剂盒测定浓度，并将其作用于分离的人的中性粒细胞，在体外研究PSM-α对中性粒细胞功能的影响。利用NBT还原法检测不同浓度的重组蛋白作用中性粒细胞1h后，其NADPH氧化酶的活化情况，结果显示，100ng/ml的重组蛋白未对NADPH氧化酶产生显著影响，而1μg/ml及10μg/ml的重组蛋白在1h时显著活化了中性粒细胞的NADPH氧化酶。利用流式细胞术检测中性粒细胞在1h时的呼吸爆发情况，结果表明，1μg/ml及10μg/ml的重组蛋白均显著提高了中性粒细胞的呼吸爆发强度，而100ng/ml的重组蛋白未对中性粒细胞的呼吸爆发产生明显影响。此外，我们通过流式细胞术检测中性粒细胞表面粘附分子CD11b和CD18的表达发现，1μg/ml及10μg/ml的重组蛋白PSM-α能够显著提高粘附分子CD11b和CD18的表达，而100ng/ml的低浓度重组蛋白对CD11b和CD18表达的影响不显著。同时，我们也利用实时荧光定量PCR及ELISA方法分别在转录水平及转录后水平检测6h时细胞因子IL-1β、IL-8及TNF-α的分泌，两种结果均显示，100ng/ml、1μg/ml及10μg/ml的重组蛋白均能提高IL-8的转录及表达，而对IL-1β及TNF-α则无明显影响。本研究表明，金葡菌毒力因子PSM-α作用中性粒细胞，通过活化NADPH氧化酶、刺激中性粒细胞的呼吸爆发、上调表面粘附分子CD11b和CD18的表达以及诱导炎性细胞因子IL-8的大量释放引起机体的炎症及组织损伤。本研究通过串联融合表达技术获得了PSM-α毒力蛋白，通过研究其对中性粒细胞的作用，为临床诊断及治疗金葡菌的感染提供依据，同时也为以PSM-α为靶标制备抗金葡菌疫苗奠定基础。