拟南芥抗氧化蛋白的体外纯化及抗氧化特性初步研究

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近年来抗衰老化妆品的市场销售量逐年增加,随着其迅速的发展,人们对其安全性要求也越来越高,纯天然的植物抗氧化酶研究成为趋势。植物体内的抗氧化酶主要包括:超氧化物歧化酶,过氧化氢酶,过氧化物酶,抗坏血酸过氧化物酶等。抗氧化蛋白酶作为一种生物活性成分应用于化妆品中,能直接作用于细胞,起到减少活性氧的作用,促进细胞的抗氧化修复,减少黑色素和色斑的生成等作用。主要研究成果和内容如下所述:本实验通过构建拟南芥的7个抗氧化蛋白酶载体:AtAPX1,AtAPX4,AtSOD1,AtCAT2,AtGPX1,AtGPX2,AtGPX6。通过小量诱导和大量提纯,提纯出来的蛋白有APX1,SOD1和GPX3,其中APX1浓度是3.69 mg/mL,SOD1浓度约为2.81 mg/mL,GPX3浓度约为2.11 mg/mL。蛋白层析凝胶实验检测这三个蛋白的纯度,APX1的纯度较高,其他两个蛋白纯度相对较低,未出现明显峰。提纯出来的蛋白经过与基础化妆品保湿成分的配制,组成四个化妆品样品。检测这三个蛋白化妆品功能的实验有羟基自由基清除实验,丙二醛MDA含量的测定实验和过氧化值的测定实验。在羟基自由基清除实验中,加入SOD1蛋白的化妆品样品清除率为38%±2.576,效果最好。加入蛋白APX1的化妆品样品溶液清除率为35%±1.972,效果在SOD1之后。效果不明显的是加入了GPX3的样品溶液,清除率为28%±2.869。对照化妆品样品的清除率为21%±2.245。由此实验可知SOD1和APX1加入化妆品中的抗氧化能力较为显著,而GPX3不显著。蛋白样品处理植物组织后丙二醛MDA含量的测定实验中,MDA含量最少的是加入了SOD1的化妆品样品溶液,其MDA的含量是2.24μmol/g。其次是加入APX1的样品溶液,MDA含量是3.21μmol/g。而加入GPX3的样品溶液效果不显著,MDA含量为5.56μmol/g。对照化妆品样品的MDA含量为6.23μmol/g。由实验数据可知SOD1和APX1作为化妆品功能成分的抗氧化效果较为显著,GPX3的抗氧化效果不显著。紫外照射和双氧水处理后过氧化值的测定实验中,通过一定时间处理后测定化妆品样品的过氧化值,绘出变化曲线可知其中SOD1和APX1的效果较为显著,而GPX3的效果并不显著。
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