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该文指出人促血小板生成素(hTPO)是含有332个氨基酸的糖蛋白,主要存在于肝脏中.以人胎肝组织总RNA为模板,RT-PCR方法扩增出TPO cDNA,将扩增得到的cDNA以平端形式克隆到pUC19的Smal位点,酶切鉴定和序列分析表明得到的cDNA确为hTPO cDNA,且与已知hTPO cDNA高度同源,同源性高达99.5%,其中N-端EPO类似结构域cDNA序列没有变化,而C-端的第497bp、595bp、767bp和795bp碱基分别由T、G、T、T替代了已知的G、A、G和G,从而导致166、199、256位的氨基酸由已知序列的Ser、Lys和Gly分别变为Phe、Glu和Val,而265位并没有导致氨基酸的变化;2.在克隆并分析了TPO cDNA的基础上,将全长hTPO cDNA克隆到原核表达载体pET-15b和pBV220中得到了表达,并且以pBV220为载体探讨了SD序列与起始密码子AUG之间的距离对cDNA表达效率的影响;为了进一步提高表达效率,将hTPO cDNA 5′端在不改变氨基酸的前提下修饰起始密码子AUG下游核苷酸,以PGR方法得到hTPO功能区域cDNA<,172>,在原核表达载体pET-15b中得到高效表达;进一步优化表达条件,功能片段的表达量占菌体总蛋白的15%左右;确定了表达蛋白主要以可溶形式存在于菌体细胞中,通过离子交换和分子筛层析两步纯化了表达蛋白,纯度达到90%以上.