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为了研究持续光照对包含黑视素的视网膜神经节细胞数量和形态发育的影响,新生大鼠被放置于持续光照环境中饲养20天(LL20),用免疫荧光染色标记包含黑视素的视网膜神经节细胞,荧光显微镜观察细胞形态,计算视网膜不同象限的距视乳头不同距离处的细胞密度,并与相同年龄的正常对照组作比较。 新生大鼠在持续光照环境中饲养20天后,与正常对照组相比,颞侧和上方视网膜包含黑视素的视网膜神经节细胞密度下降,鼻侧和下方的细胞密度没有显著变化。因为我们是用黑视素抗体去标记包含黑视素的视网膜神经节细胞,考虑到这种方法存在自身的局限性,即必须依赖于抗原的存在。因此为确定细胞密度下降是由黑视素蛋白表达下降还是细胞数量减少引起,我们将在持续光照环境中饲养20天的大鼠再放置于正常环境中饲养10天(LL20-LD10),令人惊讶的是,颞侧和上方视网膜的包含黑视素的视网膜神经节细胞不仅没有减少反而明显增多,说明持续光照抑制发育期大鼠黑视素蛋白的表达但却引起包含黑视素的视网膜神经节细胞数量的增加。同时我们也用neurofilament抗体标记其他类型的神经节细胞,并计算大胞体的视网膜神经节细胞的密度,发现与年龄相同的正常对照组相比没有显著差异,说明持续光照仅仅影响包含黑视素的视网膜神经节细胞的数量而对其他类型的视网膜神经节细胞数量则没有影响。 为了研究细胞数量的增多是机体对外界持续光照的一过性代偿反应还是细胞数量不可逆性的增多,我们将在持续光照环境中饲养20天的大鼠再放置于正常环境中饲养20天(LL20-LD20)和30(LL20-LD30)天,结果发现即使在正常环境中饲养足够长的时间,增多的细胞也不再减少,说明持续光照引起包含黑视素的视网膜神经节细胞不可逆性的增多。我们进一步研究了持续光照对包含黑视素的视网膜神经节细胞的作用是否与发育相关,将在正常环境中饲养了20天的大鼠转移至持续光照环境中饲养20天后重新放置于正常环境中再饲养10天(LD20-LL20-LD10),发现对于已经发育成熟的视网膜,持续光照同样也可抑制黑视素蛋白的表达,但是并不影响细胞密度。上述结果说明持续光照可抑制发育期和成熟期的黑视素蛋白的表达,但是持续光照仅仅影响发育期间包含黑视素的视网膜神经节细胞的数量,而对已经发育成熟的视网膜则不影响细胞数量。 为了进一步探索持续光照引起发育期间包含黑视素的视网膜神经节细胞数量增加的机制,我们将新生大鼠放置于持续光照环境中饲养8天后立即转移至正常光照环境中饲养22天(LL8-LD22),发现与正常对照组相比,颞侧和上方视网膜的细胞密度明显增加;同时将自出生之日起在正常环境中饲养8天的大鼠转移至持续光照环境饲养10天后重新放置于正常环境中饲养12天(LD8-LL10-LD12),发现细胞密度与年龄相同的正常对照组比细胞密度没有显著差异;上述结果说明持续光照对包含黑视素的视网膜神经节细胞数量的影响主要发生在出生后的8天内。考虑到大鼠视网膜神经节细胞的凋亡主要发生在出生后8天内,提示持续光照可能通过抑制细胞凋亡从而引起细胞数量增加。持续光照引起发育期间包含黑视素的视网膜神经节细胞数量的增多,是否会引起瞳孔对光反射和昼夜节律的改变仍需进一步研究。