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目的：建立稳定过表达、沉默表达及空载表达miRNA-145基因的人肺腺癌A549细胞株，并验证miRNA-145在A549细胞中增殖和侵袭能力的影响。方法：1.建立miRNA-145基因稳定转染A549细胞株。通过G418筛选实验确定G418最佳筛选浓度；将含有过表达、沉默表达及空载表达miRNA-145基因的重组质粒，应用阳离子脂质体介导的方法转染入人肺腺癌A549细胞，并通过荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的方法以及应用流式细胞仪直接测定转染效率，经G418加压筛选，得到稳定过表达miRNA-145基因的新肺腺癌细胞株（命名为A549/H）、沉默表达miRNA-145基因的新肺腺癌细胞株（命名为A549/L）及空载表达miRNA-145基因的新肺腺癌细胞株（命名为A549/E）。按照试剂盒进行miRNA的提取和逆转录，miRNA-145和U6引物均为广州佰而林公司设计及合成。设置反应条件后进行实时荧光定量PCR反应，反应结束后应用软件进行数据分析，得出扩增曲线和熔解曲线。对比稳定转染后各实验组的miRNA-145基因表达量，以确保获得稳定转染的细胞株。2.验证过表达稳定转染后A549/H细胞的增殖及侵袭能力的变化。实验分组：A549/H细胞；A549/E细胞；A549细胞。应用CCK8法检测三组细胞存活生长情况：观察三组细胞的生长曲线，研究比较A549/H细胞的增殖能力的变化。通过Transwell细胞侵袭实验检测三组细胞的体外侵袭能力的变化。结果：1.通过G418筛选最佳浓度测定实验，最终确定200μg/ml的G418浓度为筛选浓度。2.通过计数发绿色荧光的细胞及流式细胞仪检测细胞转染效率，过表达组、沉默表达组及空载表达组细胞转染效率均约为80%。3. qRT-PCR结果显示：与A549细胞组相比，A549/H细胞内miRNA-145明显升高（P<0.05），A549/L细胞内miRNA-145明显降低（P<0.05），而A549/E和A549细胞相比差异无显著性（P＞0.05）。4. CCK8法实验结果示：A549/H组，A549/E组及A549组细胞生长24h后，OD值分别为0.624、0.709、0.690；48h后，OD值分别为0.703、0.777、0.763；72h后，OD值分别为0.724、0.794、0.779；96h后，OD值分别为0.759、0.834、0.825。与A549组相比，A549/H组细胞在第24h，48h，72h，96h的细胞OD值显著降低。与A549组相比，A549/H组细胞增殖能力明显减弱（P<0.05），而A549/E组和A549组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。5. Transwell肿瘤细胞侵袭实验结果示：A549/H组，A549/E组及A549组三组细胞穿过基质胶的细胞数为：A549/H组41个，A549/E组73个，A549细胞组81个。与A549组相比，A549/H组细胞侵袭能力显著下降（P<0.05），而A549/E组和A549组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。结论:1．成功建立了稳定过表达、沉默表达及空载表达miRNA-145基因的三类新的人肺腺癌A549细胞株，为后续基因调控的实验提供细胞模型。2.过表达miRNA-145稳定转染可有效抑制A549细胞的生长增殖及侵袭能力，为深入研究miRNA-145基因在肺腺癌中的生物学行为及其机制奠定基础，并为miRNA-145靶向治疗肺腺癌提供理论依据。