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大肠杆菌病是猪群中常见多发的细菌性疾病,是严重危害仔猪安全的重要传染病之一,目前防治该病的主要手段是使用抗生素,因此导致耐药现象越来越严重。大肠杆菌是人与动物的重要共生病原菌,动物源耐药菌的大量出现与广泛流行,不仅严重影响到畜禽养殖业的持续健康发展,而且严重威胁动物性食品安全和人类健康。为指导临床科学选用抗生素,迫切需要对河南地区大肠杆菌临床耐药性进行监测,尤其是对氟苯尼考、头孢噻呋、粘杆菌素的主要耐药基因floR、CTX-M、mcr-1分布特征进行研究。因此,本文开展了河南省猪源大肠杆菌耐药性调查研究。1.本课题对2013年～2018年分离的856株猪源大肠杆菌进行了 8类13种抗菌药物的药物敏感性试验。结果显示,所有菌株均有不同程度的耐药,且对四环素、多西环素、磺胺异恶唑、复方新诺明、氨苄西林一直保持较高的耐药率(90%左右);对其他药物耐药率依次为:氟苯尼考(79.8%)、大观霉素(74.8%)、恩诺沙星(45.6%)、氧氟沙星(32.2%)、粘杆菌素(31.1%)、阿莫西林/棒酸(30.0%)、庆大霉素(25.5%)、头孢噻呋(15.5%);对粘杆菌素的耐药率从2013年～2015年持续增高,到2015年达到最高(56.6%),2015年之后开始下降直到2018年的0%。2.建立了猪源大肠杆菌中对临床常用药物氟苯尼考、头孢噻呋、粘杆菌素的主要耐药基因floR、CTX-M、mcr-1的多重PCR检测方法。通过对多重PCR体系的引物及退火温度等参数的优化,并考察了方法的灵敏度、特异性和重复性等。该方法的灵敏度为1.46× 105 CFU/mL,并且具有较高的特异性和稳定性,与单重PCR的符合率在98%左右,与传统的单重PCR相比,该多重PCR技术快速高效实用性强,为检测大肠杆菌临床常用药的耐药基因提供了新的技术手段。3.利用所建立的多重PCR检测方法,对分离的856株大肠杆菌主要耐药基因floR、CTX-M、mcr-1进行检测。结果显示,floR基因检出率为67.9%(581/856),其中郑州72.3%、开封84.9%、许昌82.3%、焦作48.5%;CTX-M基因检出率为8.4%(72/856),其中郑州2.1%、焦作6.3%、开封16.5%、许昌15.7%;mcr-1基因检出率为27.6%(236/856),其中郑州10.2%、焦作7.2%、开封45.6%、许昌43.8%。对不同地域用药习惯对大肠杆菌耐药基因分布和流行影响进行了分析研究,探明了不同地域用药习惯对耐药基因的分布和流行所产生的影响。通过本课题的研究,调查了 2013年～2018年河南省猪源大肠杆菌临床耐药情况,建立了猪源大肠杆菌分别对氟苯尼考、头孢噻呋、粘杆菌素主要耐药基因floR、CTX-M、mcr-1的多重PCR检测方法,初步掌握了河南省猪源大肠杆菌floR、CTX-M、mcr-1基因的分布特征,将对猪源大肠杆菌耐药性风险评估和临床科学用药提供参考,进而为保障食品安全、公共卫生安全和生态环境安全提供技术支撑。