[研究目的]神经病理性疼痛是由神经系统原发性损伤和功能障碍所激发或引起的疼痛,其发病机制复杂,一直是疼痛治疗的难点。痛觉是多种机制综合作用的结果,由于神经病理性疼痛形成和维持的参与因素极其复杂,因此寻找安全有效治疗药物是急需解决的难题之一。RhoA/LIMK/cofilin是调节细胞骨架结构和功能的一条重要信号通路,在细胞迁移、分化和生存等方面起到重要作用,同时参与多种受体从高尔基体到细胞膜的转运和活化,以及神经元突触结构的重塑,从而与疼痛的级联放大和慢性化转变存在密切联系。本研究提出RhoA/LIMK/cofilin通路通过对细胞骨架的改变,促进细胞内合成的痛觉相关受体向细胞膜的转运从而参与神经病理性疼痛的发生发展,并证实Simvastatin通过抑制该通路的活化、抑制肌动蛋白介导的细胞内受体转运,缓解大鼠神经病理性疼痛,为治疗提供新的靶点。[研究方法]检测CCI神经病理性疼痛大鼠DRG中RhoA/LIMK/cofilin通路的表达及活化情况——雄性SD大鼠,体重180-200g,采用随机数字表法随机分为①正常对照组(Naive)(N=12)；②假手术组(Sham)(N=30):进行大鼠假手术,仅暴露双侧坐骨神经不结扎；③坐骨神经压迫损伤组(CCI组)(N=30)：建立大鼠CCI模型。在建模后1、3、7、14及21天监测3组大鼠机械刺激诱发痛、热刺激诱发痛行为学指标。实时定量PCR法检测大鼠L4-6 DRG中RhoA和其效应分子Rho激酶(Rho kinase,ROCK)的mRNA表达水平；Western-blot法检测RhoA/LIMK/cofilin信号转导通路中RhoA、p-LIMK、p-cofilin蛋白表达水平变化以及RhoA蛋白在细胞质和细胞膜中表达比例的变化；免疫组化对RhoA定位检测。干预RhoA/LIMK/cofilin通路表达,研究其对CCI神经病理性疼痛大鼠疼痛行为学的影响及分子机制——雄性SD大鼠,体重180-200g,采用随机数字表法随机分为①Simvastatin组(1 μg/μl,10μl/d,n=6)及其溶剂对照Vehicle组(0.9%生理盐水,5% dimethyl sulfoxide (DMSO),5% Cremophor EL, n=6);②Rho激酶(Rho kinase, ROCK)抑制剂Y-27632组(4 mg/ml溶于生理盐水,48μg/d,n=6)及其溶剂对照组vehicle组(n=6)；③ cofilin磷酸化抑制剂Tat-S3 (1 μg/μl,30 μg/d, n=6)组及其对照Tat-S3A组(n=6)；④阴性对照组(negative control, NC) (n=6)。除阴性对照组外各组均行坐骨神经慢性压迫手术,手术连续七天分别经鞘内注射各组药物及相应对照试剂,于术前及术后第1、3、7、14天进行动物行为学评估,观察大鼠对机械和热刺激的反应。Western-blot法检测各组RhoA蛋白表达和分布的变化及LIMK、cofilin磷酸化水平变化。[结果]1.CCI降低大鼠缩足反射热辐射潜伏期、降低缩足反射机械刺激阈值(P<0.05)；simvastatin组大鼠给与simvastatin后第3天起缩足反射热辐射潜伏期、缩足反射机械刺激阈值明显高于CCI.组,差异具有统计学意义(P<0.05)；ROCK抑制剂Y-27632组大鼠缩足反射热辐射潜伏期、缩足反射机械刺激阈值给药后3天起较CCI组明显提高,差异具有统计学意义(P<0.05)；cofilin磷酸化抑制剂Tat-S3组大鼠缩足反射热辐射潜伏期、缩足反射机械刺激阈值给药后7天起较CCI组明显提高,差异具有统计学意义(P<0.05)。2.CCI组大鼠DRG中RhoA mRNA于术后第3天起表达显著增加(P<0.05)；蛋白水平RhoA、p-LIMK和p-cofilin于CCI术后均表达上调。RhoA蛋白在背根神经节神经元中表达,CCI术后RhoA免疫荧光强度与Naive组比显著增高(P<0.05)3.鞘内注射Simvastatin能显著抑制通路主要因子RhoA、p-LIMK、 p-cofilin的表达(P<0.05),降低RhoA蛋白细胞膜／细胞质表达比例。[结论]大鼠CCI慢性神经病理性疼痛存在RhoA/LIMK/cofilin通路的激活。鞘内注射Simvastatin可有效缓解CCI神经病理性疼痛大鼠疼痛行为,抑制该通路的活化,降低RhoA蛋白从细胞质向细胞膜的转运,为治疗神经病理性疼痛提供新的靶点。