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为探讨低浓度敌百虫农药对肝脏的慢性毒性作用及其机理,本试验采用两步酶消化法建立大鼠原代肝细胞细胞培养模型,通过给细胞培养液中加入敌百虫,研究了敌百虫对体外原代培养SD大鼠肝细胞存活率、形态特征、超微结构、细胞凋亡、细胞内活性氧(ROS)、线粒体膜电位(Δψm)、细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)、细胞内pH(pHi)和细胞缝隙连接通讯(GJIC)的变化,并探讨了以上因素在敌百虫诱导肝细胞凋亡中的可能机制。结果:①0、2、10、50 mg/L敌百虫染毒12、24 h均可不同程度抑制肝细胞的增殖,且存在时间-剂量效应;②扫描电镜观察染毒肝细胞,细胞体积变小,细胞间隙变大,肝细胞明显皱缩。透射电镜下,肝细胞核皱缩、裂解,线粒体线粒体肿胀变性;③各染毒组大鼠肝细胞随染毒剂量的增大和染毒时间延长,细胞凋亡率增大。染毒12h、24 h,各染毒组凋亡率均显著或极显著高于对照组(P﹤0.01或P﹤0.05);④染毒12h、24 h,各染毒组细胞内Ca2+浓度均显著高于对照组(P﹤0.05),但随染毒剂量的增加,细胞内Ca2+浓度逐渐下降;⑤与对照组相比,各染毒组细胞内ROS水平在均升高;⑥染毒12 h,细胞内线粒体膜电位(Δψm)出现持续下降,2 mg/L组和50 mg/L组差异均极显著低于对照组(P﹤0.01)。10 mg/L组显著低于对照组(P﹤0.05)。⑦除染毒24h的2mg/L组,不同浓度敌百虫组pHi均显著或极显著低于对照组(P﹤0.05或P﹤0.01);⑧随着敌百虫浓度的升高,Na+-K+-ATPase和Ca2+-Mg2+-ATPase活性逐渐下降,染毒12 h,各染毒组Na+-K+-ATPase活性显著或极显著低于对照组(P﹤0.05或P﹤0.01),Ca2+-Mg2+-ATPase活性极显著低于对照组(P﹤0.01);⑨染毒12 h、24 h后,随着敌百虫浓度的升高,荧光黄向两侧扩散的距离逐渐变小,各染毒组GJIC显著或极显著小于对照组(P﹤0.05或P﹤0.01)。结论:敌百虫染毒引起SD大鼠肝细胞存活率降低,细胞形态结构损伤,细胞凋亡率升高,细胞内钙超载,ROS水平上升,线粒体膜电位(Δψm)和pHi下降,ATPase活性降低,GJIC下调。细胞凋亡率与细胞GJIC水平呈负相关,提示敌百虫对肝细胞有明显毒性作用,肝细胞凋亡与GJIC的下调有关,其机理有待进一步研究。