玉米D族促分裂原活化蛋白激酶MAPK基因ZmMPK17的分离与功能分析

来源 :山东农业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:wcz741335565
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)级联途径是真核生物中普遍存在的高度保守的信号转导模式。MAPK级联途径由三个蛋白激酶组成:MAPKKK、MAPKK和MAPK,这三个信号转导组分通过逐级磷酸化作用将外界信号级联放大并向下传递。大量研究表明,MAPK级联途径在植物调控生物与非生物胁迫,生长发育以及植物激素信号转导过程中起着重要作用。系统进化树分析发现,MAPK家族成员主要分为A,B,C,D四族,有关A,B和C族MAPK功能的研究比较深入,但关于D族MAPK功能研究的相关报道主要集中在水稻中。本研究从玉米品种郑单958叶片中克隆到一个D组MAPK基因,命名为ZmMPK17,对其序列特征,表达模式,过表达转基因烟草的抗逆生理功能,以及其上游的组分做了初步研究。主要结果如下:(1)从玉米中分离到一个促分裂原活化蛋白激酶基因:ZmMPK17,该基因的开放阅读框长1476bp,编码一个491个氨基酸的蛋白,对其序列分析发现,该蛋白具有MAPK进化上保守的11个蛋白激酶催化结构域。在第七和第八结构域之间的激活环中有一个MAPKK的磷酸化位点TDY基序。进化树分析表明,ZmMPK17属于D族的MAPK。(2)将ZmMPK17与GFP荧光蛋白融合后,瞬时转化洋葱表皮细胞,发现ZmMPK17主要定位于细胞核,并且ZmMPK17蛋白的C-末端延长区对其核定位是必须的。(3)通过Northern blot及qRT-PCR分析发现,ZmMPK17在玉米根、茎、叶中均有表达,在根中表达量最高。4℃、ABA、SA、MeJA和ETH处理均能诱导ZmMPK17的表达,而PEG、H2O2、NaCl和高温则抑制ZmMPK17的表达。H2O2和Ca2+介导PEG和4℃对ZmMPK17表达的调控。(4)对ZmMPK17基因的启动子分析发现,启动子中含有多个响应生物与非生物胁迫的顺式作用元件。对ProZmMPK17::GUS转基因烟草GUS染色分析表明,低温(8℃)、ABA、SA和JA处理不同程度地诱导了GUS基因的表达,而PEG处理则抑制GUS的表达。这些结果与表达分析的结果基本一致。(5)将ZmMPK17及其失活突变基因ZmMPK17-AF构建pBI121表达载体,成功转化烟草,Northern blot和Western blot结果表明,ZmMPK17在转基因植株中正常表达。(6)在渗透胁迫下,过表达ZmMPK17的转基因烟草积累了较少的ROS,具有较高的抗氧化酶活性(APX和CAT),MV处理后表现出较强的抗氧化能力,这表明过表达ZmMPK17通过ROS的清除,增强对渗透胁迫的抗性。(7)在低温胁迫下,过表达ZmMPK17及失活型ZmMPK17-AF的转基因烟草种子萌发率明显高于WT,并且积累了较多的渗透调节物质(包括可溶性糖和脯氨酸)。这表明过表达ZmMPK17增强了转基因烟草株系的低温抗性,并且ZmMPK17激活环中TDY基序的磷酸化对其低温抗性并不是必须的。(8)在渗透和低温胁迫下,过表达ZmMPK17增强了转基因烟草株系中胁迫相关基因的表达。(9)用病原菌CMV和PVY侵染后,过表达ZmMPK17的转基因烟草株系表现出较轻发病症状,CMV和PVY的积累受到明显抑制,而且抗病相关基因的表达要高于WT和AF株系。(10)利用酵母双杂交实验发现,ZmMPK17并没有与CaMs和ZmMKKs发生互作,并且从cDNA文库中也没有筛选到与ZmMPK17互作的蛋白。ZmMPK17与其它蛋白的相互作用,还需要通过其它方法做进一步的验证。
其他文献
宁国市地处皖东南,总面积2487平方公里,辖16个乡镇3个街道办事处,总人口37.94万人,其中,农业人口29.09万人.2003年实现国内生产总值46.6亿元,财政收入4亿元,农民人均纯收入28
我国北方干旱、半干旱区占我国陆地面积的40%左右,以往的工作者对该区的陆面过程作了许多?的研究,但对于陆面过程的气候区域特征和陆面过程对气候的相关特征的研究还很少,对
《新编乡镇卫生院财务管理》一书,由盐城市卫生局王国和、徐州市卫生局郭成杰主编,第二军医大学出版社出版。
期刊
生态自然观是继天然自然观和人工自然观之后的一种全新的自然观,它的核心是强调人与自然的协调,关注人类生态系统的发展。生态自然观是可持续发展的指导观念和哲学基础,可持
作物健康成长、收获,种子管理是关键。近日,埃尔夫集团公司与业内著名媒体《农资与市场》杂志社签署合作协议,独家冠名“2014作物全程解决方案高峰论坛”。
让老百姓信任我们,才是解决‘农闹’的根本方法。而这种方法,需要细节,细心,需要真正的为老百姓做好服务。“医闹”是这个变革的社会民众冲突的缩影,源于利益至上的思潮与信
在中国近代史上,由于妇女运动者对中国国情认识不同,产生了三种不同的妇女运动观.女权主义者主张通过妇女参政的途径来实现女权;中国共产党重视民族、国家的独立、封建制度的
知识经济的到来,既为广大女性提供了更加广阔的发展空间,同时,也对女性的素质提出了更加严格的要求.广大女性只有不断地优化其文化素质、能力素质、心理素质和思想素质等,方
鄂尔多斯盆地苏里格地区盒8段储集层地质特征复杂,测井响应特征多变。开展储层孔隙结构的研究是正确认识储层地质特征的关键,也是测井储层评价中正确建立测井解释模型的前提
<正>1987年1~5月份,某种羊场小尾寒羊发生一种成年羊表现发热、鼻炎、结膜炎,孕羊表现流产、死胎、羔羊及青年羊主要表现为败血症及神经症状,发病率不高,但病死率极高的传染性