目的:非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）是肺部恶性肿瘤之一,病理类型多为肺腺癌和肺鳞癌,预后较差。Notch信号通路在机体发育中起着重要作用,研究表明Notch基因既是原癌基因又是抑癌基因,与NSCLC的肿瘤发生、发展和免疫耐受相关。近年,研究发现快速的有氧糖酵解保证肿瘤快速增殖的能量供给和生物大分子合成的原料供给,是肿瘤细胞的代谢特点之一。在前期研究中我们发现Notch3信号通路调节细胞增殖,是否调节糖酵解尚不明确。所以本研究拟通过改变Notch3蛋白表达水平的变化,观察线粒体膜电位的变化、细胞外酸化率、细胞外乳酸含量、糖酵解相关基因表达变化,初步探究Notch3对NSCLC糖酵解的调节作用。方法:本研究利用表达Notch3 shRNA的慢病毒包装质粒和嘌呤霉素（puromycin）抗生素筛选、构建稳定表达Notch3敲低的H1299细胞系,通过Western blot确认敲低细胞系的建立;通过JC-1染色与流式细胞仪检测线粒体膜电位;通过线粒体压力测试试剂、糖酵解压力测试试剂和Seahorse能量检测仪细胞外酸化率;通过乳酸检测试剂盒测定细胞外乳酸含量;利用lipo3000转染质粒Notch3胞内段（Notch3 intracellular domain,NICD3）-3×Flag-CMV14和遗传霉素（Geneticin,G418）筛选、构建稳定过表达NICD3的H1299细胞系;通过Western blot确认过表达细胞系的建立;通过CCK-8试剂盒检测细胞增殖,验证敲低/过表达对细胞功能的影响;通过Western blot检测关键蛋白己糖激酶（hexokinase2,HK2）、丙酮酸激酶M2（pyruvate kinase M2,PKM2）、乳酸脱氢酶A（lactate dehydrogenase A,LDHA）、单羧酸转运蛋白4（monocarboxylate transporters 4,MCT4）的表达。结果:1.Notch3基因敲低后抑制细胞增殖。2.JC-1染色结果表明Notch3低表达后降低细胞线粒体膜电位。3.线粒体压力测试实验显示Notch3敲低降低线粒体功能,糖酵解压力测试实验显示Notch3低表达提高细胞外酸化率。4.Notch3低表达后细胞外乳酸含量升高。5.Notch3敲低后HK2、PKM2、LDHA、MCT4蛋白表达提高。6.Notch3基因过表达后促进细胞增殖。7.Notch3过表达后细胞外乳酸含量没有变化。8.Notch3过表达后HK2、MCT4蛋白表达降低,PKM2蛋白表达升高。结论:1.Notch3调节H1299细胞株的增殖。2.Notch3表达变化影响H1299细胞糖酵解,与Notch3敲减降低线粒体膜电位有关,与Notch3的转录调节功能无直接相关。