冬虫夏草免疫鉴定技术研究

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冬虫夏草是蝙蝠蛾幼虫被虫草菌感染,死后尸体、菌丝和组织形成坚硬的假菌核,在冬季低温干燥的土壤中数月保持虫形不变(冬虫),在夏季高温潮湿时从菌核中长出棒状子实体即子囊座(夏草),并露出地面。冬虫夏草主要分布在我国青海、西藏、四川、云南、贵州等地,主要化学成分为核苷类、氨基酸类、多糖类、醇类以及一些无机元素等,可入药,具有强肾、润肺、益精气、免疫调节、理诸虚百损等功效。由于冬虫夏草作用明显,野生产量稀少,导致冬虫夏草价格连年上涨,目前有的已达每公斤20万元甚至更高,这就给不法分子造成可乘之机,市场上假货泛滥,各种造假手段层出不穷,其中较高级的造假手段是用虫草属的其他虫草冒充,常见的有蛹虫草、凉山虫草、亚香棒虫草等,由于也是虫草所以外观很难区别。目前的冬虫夏草鉴定方法主要以望闻尝切为主,跟鉴定人的经验技术有很大关系,都是主观判断,缺乏客观技术指标,准确性欠佳。先进的冬虫夏草鉴定方法为DNA测序,但这种方法目前很难推广应用,研究一种简便、准确、特异性好、科学的冬虫夏草鉴定方法非常必要,意义也非常重大。为了保持和发挥我国冬虫夏草的品牌优势,必须在更高层次上深入研究,完善冬虫夏草的鉴定手段。免疫分析技术近年来飞速发展,在医药、生物技术、环境、农业等领域应用极广,相关检测产品达上万种,但在天然药物尤其是中药领域几乎未见应用,中药鉴别还是普遍使用外观、显微鉴别、化学反应等方法,制约中药现代化的发展,技术手段亟待提高。免疫分析技术是基于蛋白质抗原和抗体之间或小分子半抗原和抗体之间特异反应的分析方法,是生物化学分析的重要手段之一。免疫分析技术具有灵敏度高、专属性强、样品用量少、简捷快速的优点,非常适合用于中药材的鉴定,尤其适合外观相像的真伪品的鉴别。本实验创造性的用免疫分析技术鉴别天然药物(冬虫夏草)的真伪。本实验首先采用浸泡研磨的方法提取出冬虫夏草蛋白质,然后用聚丙烯酰胺凝胶电泳比较出冬虫夏草区别于蛹虫草和凉山虫草的特异蛋白质,继而用试剂盒回收冬虫夏草的特异蛋白质,并用聚丙烯酰胺凝胶电泳验证已成功提取出冬虫夏草的特异蛋白质,然后大量回收冬虫夏草的特异蛋白质,用兔免疫制备多克隆抗体、用细胞杂交技术制备单克隆抗体,最后用金标试纸法检测冬虫夏草的抗原以区别冬虫夏草与其他主要伪品。进一步的实验可以对市售的大量药材进行鉴定试验,然后对鉴定技术进行标准化研究。本实验的关键技术在于对冬虫夏草的特异蛋白质的成功提取。本实验的创造性成果在于从天然药物中提取出了具有免疫活性的抗原,完成了免疫技术鉴定天然药物的全过程,为天然药物的高专属性免疫鉴定技术工作做出了开拓性的研究。冬虫夏草免疫鉴定技术研究从研究冬虫夏草免疫鉴定技术出发,系统地研究整个技术过程,建立起科学可行的检测方法,可用于冬虫夏草的真伪鉴定,具有很好的应用前景,在此基础上,可以将该技术推广到其他中药材的免疫鉴定技术研究中去,能够有效地提高中药材鉴定技术的整体水平,科学意义重大。
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