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目的: Myocardin可以促进血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)的分化,在血管的发育过程中起着重要作用,四磷酸脲腺苷(uridineadenosine tetraphosphate, Up4A)是最近发现的内皮源性血管收缩因子(endothelial-derived constricting factor, EDCF),因此我们的研究目的是探讨Up4A是否促进大鼠VSMCs中myocardin mRNA表达。
方法: 组织块贴壁法培养大鼠主动脉VSMCs,4-8代的SMCs用于实验。首先将细胞接种至24孔板中培养,用高糖DMEM/F12培养基(0.5％FBS, 1％penicillin-streptomycin)培养基饥饿72 h后,分别用60 mM KCl或不同浓度Up4A(100、10、1、0.1、0.01、0.001 μM)处理细胞24 h,然后提取总RNA,将RNA反转录为cDNA后,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-timequantitative polymerase chain reaction, Real-time PCR)法,以β-actin为内参基因,测定大鼠VSMCs中myocardin mRNA表达情况。
结果:
1.如文献报道KCl处理可促进myocardin mRNA的表达,结果所示,用60 mM KCl刺激大鼠VSMCs后myocardin mRNA相对表达量为1.00±0.16, n=3,而阴性对照组(Control)为0.45±0.16, n=3(p<0.05)。
2.用1 nM Up4A刺激大鼠VSMCs后myocardin mRNA表达明显升高(1.21±0.19, n=3),同Control比较(0.45±0.16, n=3)具有显著性差异(p<0.05)。然而,高浓度Up4A(100、10、1、0.1、0.01 pM)对myocardinmRNA的影响无显著性差异。
结论:
1.低浓度Up4A (1 nM)能促进VSMCs中myocardin mRNA的表达；
2.高浓度的Up4A对myocardin mRNA的表达无明显作用；
3.不同浓度Up4A对VSMCs的作用不同,预示Up4A在VSMCs增殖性疾病中起到了重要作用。