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马铃薯是重要的粮食作物和经济作物,在世界范围内广泛种植。病毒病是影响马铃薯生产的主要病害之一,严重影响马铃薯的产量和质量,制约马铃薯产业的发展。近年来,重庆市马铃薯种植面积逐年增加,病毒病的发生危害呈上升趋势。为了弄清重庆地区马铃薯病毒病的发生危害及病原种类,本研究在本市部分马铃薯主要种植区开展了病毒病田间调查,利用Dot-ELISA和RT-PCR技术对马铃薯病毒病样品进行了病原种类的鉴定。1.重庆地区马铃薯病毒病的田间调查在重庆万州、云阳、丰都、黔江、江津等5个马铃薯种植区县开展马铃薯病毒病田间调查,调查发现马铃薯病毒病症状类型多样,包括花叶、畸形、黄化、矮化、卷叶和坏死型,以花叶型为主,部分病株表现为多种症状的混合型。黔江地区马铃薯病毒病发病率最高,达30.50%；其次是云阳、江津和丰都,发病率分别为29.17%、23.67%及18.50%；发病率最低的是万州,为11.67%。海拔500-1000m的地区马铃薯病毒病发病率最高,为28.50%；海拔500 m以下的地区次之,发病率为22.40%；海拔1000 m以上的地区马铃薯病毒病发病率最低,为17.20%。云阳县上坝乡石梁村马铃薯病毒病病情指数最高,达29.67,发病最轻的是万州区李河镇彭河村,病情指数为4.67。2.马铃薯上7种茄科蔬菜常见病毒的Dot-ELISA检测从万州、云阳等9个区县采集了238个马铃薯病毒病样品,利用PVX、PVY、 CMV、TMV、ToMV、TuMV和BBWV-2等7种茄科蔬菜常见病毒的特异性血清对其进行Dot-ELISA检测。结果表明,共有205个样品与7种病毒供试血清中的一种或多种血清发生不同程度的阳性反应,阳性样品的总检出率高达86.13%。其中,PVX侵染最为普遍,总检出率达64.71%；其次为PVY、BBWV-2和CMV,其总检出率分别为56.30%、54.20%和50.00%；TMV和ToMV的总检出率分别为47.48%和44.12%；TuMV的检出率相对较低,为41.18%。在205个阳性样品中,仅有11个样品受单一病毒侵染,检出率为5.37%；其余样品均受2种及2种以上病毒复合侵染,其中,4种病毒复合侵染的样品占阳性样品的比例最高,为20.98%；7种病毒复合侵染所占比例较低,为7.32%。对丰都、巫山、巴南和涪陵等4个区县的84份马铃薯病毒病样品进行CMV亚组鉴定,共有49份样品分别与CMV两种亚组(CMV Ⅰ和CMV Ⅱ)的单克隆抗体发生了阳性反应,其中,31个样品仅检测到CMV Ⅰ单独侵染,占63.27%；CMV Ⅱ单独侵染与受CMV Ⅰ和CMV Ⅱ的复合侵染的样品检出率一致,均为18.37%。这些结果表明,田间马铃薯上病毒复合侵染现象严重；在以上7种病毒中,PVX为重庆马铃薯上的优势毒源；CMV Ⅰ是重庆地区马铃薯作物上CMV的优势亚组类型。3.马铃薯上7种茄科蔬菜常见病毒的RT-PCR检测在巴南和涪陵样品中共选取16个样品,利用RT-PCR技术对其进行PVX、PVY、CMV、TMV、ToMV、TuMV和BBWV-2等7种茄科蔬菜常见病毒的分子检测。比较发现Dot-ELISA和RT-PCR两种检测方法的结果基本一致,除部分样品在RT-PCR中被检出的病毒种类而在血清学检测中未检测出之外,其余血清学检测呈阳性的病毒样品在分子检测中都扩增到了相应病毒的特异性片段。4.马铃薯上其它病毒的分子检测及序列分析从巫溪、江津和万州等8个马铃薯种植区县采集病毒病样品54个,对其进行针对PVA、PVS和PVM等3种马铃薯病毒的RT-PCR检测,并将扩增的相应CP基因片段进行了克隆、测序及序列分析。结果表明,54个样品中共检测到37个阳性样品,其中,PVA的检出率最高,为51.85%；其次是PVS,检出率为40.74%；PVM的检出率最低,仅为7.41%。对PVA、PVS和PVM的CP基因序列分析表明：PVA重庆分离物(PVA-CQ)与英国苏格兰马铃薯Sam-05-PVA、Sam-09-PVA分离物以及马铃薯Pon分离物的相似性最高,达98.8%；PVS重庆分离物(PVS-CQ)与中国马铃薯Yunnan YN分离物的相似性最高,为98.6%；PVM重庆分离物(PVM-CQ)与中国甘肃人参果Gansu分离物的相似性最高,为98.3%。本研究对重庆地区马铃薯病毒病进行了田间调查,对多个区县病毒侵染马铃薯的情况进行了检测和鉴定,明确了马铃薯病毒病的主要病原种类,为重庆市的马铃薯病毒病防治提供了科学依据。